- 단지 몇 주 만에 재조합 adenovirus 제작
- 간편한 ligation방법으로 재조합 adenoviral DNA 구축
- 분열세포나 비분열세포 모두에서 효과적으로 단백질 발현
Adeno-X Expression System 1은 ligation 방법으로 다양한 포유류 세포에서 단백질을 고발현시킬 수 있는 adenovirus vector를 제작할 수 있다. Adeno-X expression system은 일반적인 transfection 이나 다른 adenovirus system을 능가하는 몇 가지 주요한 장점을 지니고 있다.
- 높은 단백질 발현 수준 : 목적 유전자를 함유한 재조합 adenovirus는 multiple copy와 높은 효율로 목적 세포를 감염시킨다. 감염된 세포는 일시적으로 목적 단백질을 고발현시킨다.
- 다양한 포유류 세포에 효율적으로 감염 : Adenovirus는 human cell 대부분과 그 외 mouse, rat, dog, chicken, rabbit, sheep, pig 그리고 human이외의 영장류에 효과적으로 감염한다. Adenovirus는 분열세포와 비분열세포 모두에 감염할 수 있다.
- 빠른 결과를 얻을 수 있는 최적화된 실험 과정 : 본 실험 과정은 homologous recombination법을 사용하지 않는 대신 바로 ligation이 가능한prelinearized Adeno-X System 1 Viral DNA를 이용하여 효과적으로 ligation할 수 있으며 (Figure 1), 다른 방법보다 더 빠르게 재조합 adenovirus를 만들 수 있도록 최적화되어 있다 (Figure2). 또한, 이 시스템은 편리한 shuttle vector인 pShuttle2와 독특한 double digestion buffer를 제공하여 cloning 시간을 단축시킨다.
- 간단한 cloning 과정: Clontech의 최적화된 ligation법과 함께 Adeno-X System1은 재조합되지 않은 adenovirus를 제거하고 전통적인 homologous recombination (Table 1)보다 더욱 빠르고 믿을 수 있는 재조합 adenovirus를 생산한다.
Adeno-X 방법
재조합 adenovirus를 생산하기 위하여 pShuttle2 vector expression cassette의 MCS (multiple cloning site)에 목적유전자를 삽입한다. 그 후 이 cassette를 매우 드물게 존재하는 제한효소 사이트 PI-Sce I와 I-Ceu 을 이용하여 pshuttle 2 Vector를 자르고 선형화된 목적유전자 단편을 Adeno-X Viral DNA (PI-Sce I와 I-Ceu I 전처리)에 ligation한다. 이어서 Swa I 으로 처리하여 insert 없는 self-ligation이나 비재조합 adenovirus DNA를 제거한다.
Ligation 반응액을 E. coli 균주에 형질도입시킨 후 제한효소처리를 통해 재조합 clone을 선별한다. 선형화된 재조합 adenovirus DNA를 낮은 passage의 HEK 293 cell lines에 transfection 시키고 며칠 뒤 재조합 adenovirus를농축한다.
Figure 1. The Adeno-X Expression System 1. The Swa I site is located between I-Ceu I and PI-Sce I in the circular, nonlinearized Adeno-X vector.
Adeno-X Expression System 1은 선형화된 Adeno-X System 1 Viral DNA, pShuttle2 Vector, pShuttle-lacZ Control Vector, PI-Sce I, I-Ceu I, Double Digestion Buffer, BSA, manual 그리고 vector 정보를 포함하고 있다. 또한 선형화된 Adeno-X System1 Viral DNA는 별도 판매되고 있다. Adeno-X System 1과 함께 Clontech에서는 제한효소, Double Digestion buffer, BSA가 포함된 Adeno-X Accessory Kit를 판매하고 있다.
Supercharge EZ10 Electrocompetent Cells
Supercharge EZ10 Electrocompetent Cell은 최고 수준의 형질 전환 효율 (1010 transformants/ug pUC19)을 얻을수 있다. (3). 이와 같은 높은 형질 전환 효율은 adenovirus vector와 같이 큰 plasmid를 형질 전환할 때 매우 중요한 요소가 된다. 따라서 모든 Adeno-X Expression System에서는 Supercharge EZ10 Electrocompetent Cell 사용을 적극 권장한다. 이 세포는 다른 일반적인 균주보다 뛰어난 genome 안정성, 더 높은 cloning 효율, 더 많은 plasmid DNA의 수율을 제공한다.
Figure 2. Adeno-X Expression System 1 lets you produce recombinant adenovirus in a fraction of the time required by other adenoviral systems.
Components & Storage Conditions
각 제품 구성물과 보관조건은 Certificate of Analysis 를 참조하십시오.