하나의 mRNA로부터 목적 단백질과 selection marker (항생제, 형광 단백질) 동시 발현
Selection marker를 이용해, 목적 단백질을 발현하는 세포의 식별 과정 단축
더 빠르고, 안정적으로 clone을 선별하기 위한 bicistronic expression
IRES의 활용
IRES (Internal Ribosome Entry Site) promoter가 도입된 vector는 목적 단백질을 발현하는 clone을 빠르고 효과적으로 선별할 수 있게 한다. 이 vector는 하나의 promoter로 목적 유전자와 선별 마커 (Figure 1) 또는 Living Colors Fluorescent Protein (Figure 2) 모두를 발현할 수 있는 cassette를 가지고 있다. 그러므로 실질적으로 마커를 발현하는 세포는 목적 유전자를 발현한다. 이런 vector를 이용하면 최소한의 선별과정으로 목적 단백질을 높게 발현하는 clone을 선별할 수 있다.
Figure 1. Map of the pIRES Selection Vectors.
Figure 2. Map of the Fluorescent pIRES2 Bicistronic Expression Vectors.
형광 단백질을 Selection marker로 발현하는 pIRES2 Vector의 활용
Living Colors pIRES2 Vector는 완전히 활성화된 IRES 서열을 포함하고 있어 형광단백질을 높게 발현시킬 수 있다. 마커는 융합 단백질이기 보다는 개별적인 단백질이기 때문에 목적 단백질의 생물학적 활성에 대한 위험이 거의 없다. pIRES2 vector는 일시적으로 transfection된 세포의 농축이나 형광 강도를 통해 목적 유전자의 발현 수준을 관찰 하는데 유용하게 활용될 수 있다.
Figure 3. Schematic diagram of bicistronic mRNA translation.
The internal ribosome entry site (IRES) permits a protein of interest and either an antibiotic resistance marker or fluorescent protein to be translated from the same mRNA. IVS = synthetic intron.
구성 및 보관
- 자세한 구성과 보관 조건은 Certificate of Analysis 를 참조하십시오.
References
- Jackson, R. J. et al. (1990) Trends Biochem. Sci. 15:477-483.
- Jang, S. K. et al. (1988) J. Virol. 62:2636-2643.
- Rees, S. et al. (1996) Biotechniques 20:102-110.
