제품설명
TaKaRa Taq HS Perfect Mix는 Taq DNA polymerase를 업그레이드하여 신장 속도와 특이성을 높인 개량형 PCR효소를 사용하고 있다. 신장 시간을 20 sec./kb로 설정한 고속 PCR조건에서 특이적인 PCR증폭을 신속하게 수행할 수 있다. 이 효소는 상온에서 DNA polymerase활성을 억제하는 monoclonal antibody를 첨가한 hot start PCR효소로 PCR반응 전 mis-priming이나 primer-dimer에 기인하는 비특이적 증폭을 억제할 수 있다. 이 항체는 활성화를 위한 별도의 pre-denature 단계는 필요 없다. 또 반응 구성물을 premix화하여 상온에서 신속한 반응액 조제가 가능하다. 이 효소는 5'→ 3'exonuclease활성 및 3'→ 5'exonuclease활성이 없다.
내용 (100 rxns)*
TaKaRa Taq HS Perfect Mix(2×) 500μ l× 5
* 50 μl PCR 반응시
보존
- 20℃
기원
Escherichia coli carrying a plasmid that encodes the Thermus aquaticus DNA polymerase gene.
용도
Hot Start PCR법에 의한 DNA증폭
품질 검정
인간 게놈을 주형으로 고속 PCR반응(증폭 산물 2 kb)에서 양호한 증폭을 확인했다.
일반적인 PCR반응 조성(total 50 μl)

TaKaRa Taq HS Perfect Mix

25 μl

Template

<250 ng

Primer 1

0.2μM *1 (final conc.)

Primer 2

0.2μM *1 (final conc.)

멸균 증류수

up to 50μl

주) 반응 액체의 실온 조제도 가능하지만 시약은 반드시 얼음 위에 놓고 사용한다.
*1 Ramp temperature speed가 5℃ 이상의 Fast Thermal cycler를 이용하는 경우, primer농도를 0.6μM로 설정해 주세요.
Primer설계
Primer는 Tm값이 55℃ 이상 되도록 설정한다.
(Tm값은 아래의 Tm근사 계산식 ※로 계산)
※ Tm값=4×(G, C의 수)+2×(A, T의 수)+35-2×(총 염기 수)
주) Nearest Neighbor법을 이용한 Tm값을 이용하는 경우는 Primer의 Tm값이 60℃ 이상 되도록 설정한다.
PCR조건

*2 변성 온도는 반드시 94℃로 설정하세요. 변성 온도를 95℃ 이상 설정할 경우 효소 불활성화로 반응이 저하될 수 있습니다.
*3 계산한 Tm값이 55℃ 이하의 경우(Nearest Neighbor법으로 계산한 Tm값이 60℃ 이하의 경우)는 3 step PCR을 권장합니다.

[주의]
본 제품은 기존의 기본PCR효소 보다 매우 적은 양의 주형도 증폭 할 수 있는 PCR효소이다. 일부 미생물 검출을 목적으로 하는 실험에서, 반응에 혼입된 환경 미생물의 미량의 게놈 DNA를 주형으로 증폭하는 경우가 있을 수 있습니다. 이 경우에는 PCR cycle 수를 줄이고 primer 서열을 변경하기 바랍니다.
PCR산물에 대해
TaKaRa Taq HS Perfect Mix를 이용해 증폭된 PCR산물의 대부분은 3'말단에 A가 1염기 부가되어 있다. 따라서 그 PCR산물을 그대로 T-Vector에 복제할 수 있다. 또 말단 평활화와 인산화한 후 평활 말단의 벡터에 클로닝 할 수도 있다.