제품설명
High Fidelity PrimeScript RT-PCR Kit은 PrimeScript RTase 와 PrimeSTAR HS DNA Polymerase를 이용하여 RNA (혹은 mRNA)로부터 cDNA를 합성하고, 그 cDNA를 증폭하기 위한 제품이다. PrimeSTAR HS DNA Polymerase는 Taq DNA Polymerase에 비해 최고의 정확도와 탁월한 합성능력을 가지고 있다. 그러므로, 본 제품은 cDNA cloning과 같이 정확도를 요구하는 중요한 실험에 사용가능하다. 또한, 본 제품에 포함된 PrimeScript RTase는 M-MLV (Moloney Murine Leukemia virus)를 기반으로 TaKaRa Bio에서 개발한 독자적인 역전사효소이다. PrimeScript RTase는 탁월한 신장성을 바탕으로 긴 cDNA 합성에 탁월하며, 본 효소를 이용하면 GC-rich 구조 혹은 2차구조를 가진 RNA를 template으로 한 역전사 반응도 기본적인 역전사 반응 온도 (42°C)에서 가능하다.
내용 (50 회*1)
PrimeScript RTase (for 2 step) 25 ㎕
5×PrimeScript Buffer 200 ㎕
RNase Inhibitor (40 U/㎕) 25 ㎕
dNTP Mixture (10 mM each) 150 ㎕
Oligo dT Primer (2.5 μM) 50 ㎕
Random 6 mers (20 μM) 50 ㎕
PrimeSTAR HS DNA Polymerase 2.5 U/㎕ 25 ㎕
5×PrimeSTAR PCR Buffer 500 ㎕
Control F-1 Primer *2 (20 μM) 10 ㎕
Control R-1 Primer *3 (20 μM) 10 ㎕
Positive Control RNA (2×105 copies/㎕) 20 ㎕
RNase Free dH2O 550 ㎕
*1 50 reactions for Reverse Transcription 20 ㎕ → PCR reaction 50 ㎕
*2 upstream sense Primer for Positive Control RNA
*3 downstream anti-sense Primer for Positive Control RNA
보존 -20℃
[Primer sequence]
Primer명 연기서열
Random 6 mers pd(N)6
Oligo dT Primer dT sequence: original design by TaKaRa Bio
Control F-1 Primer 5’-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3’
Control R-1 Primer 5’-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3’
Positive Control RNA
본 Kit에 첨부되어 있는 control RNA는 SP6 promoter 영역의 하류에 pBR322 유래의 tetracycline 내성 유전자를 함유하는, 약 1.4 kb의 단편을 삽입한 plasmid pSPTet3을 template으로 SP6 RNA Polymerase로 in vitro 전사하여 합성한 것이다.