[본 제품은 연구용 시약으로 진단(인체)목적으로 사용할 수 없습니다. 자세한 문의는 support@takara.co.kr로 연락바랍니다.]
제품설명
Kudoa septempunctata (18S rRNA) qPCR Detection Kit은 후생노동성 의약식품국 식품안전부 감시안전과에서 공지한 「Kudoa septempunctata의 검사법에 대해(잠정판)」 ( 0711 제1호)(이하 「공정법」이라고 기재한다)와 동일한 염기 서열의 primer와 Dual-Labeled probe를 사용한 Kudoa septempunctata 검출 제품이다.
Kudoa septempunctata는 물고기의 근육에 기생하는 점액 포자충이며, 넙치에 의한 식중독 원인 중의 하나로 생각되고 있다. 본 제품의 증폭 반응에 이용하는 Premix Ex Taq은 anti-Taq 항체를 이용한 hot start PCR용 효소, TaKaRa Ex Taq® HS와 Real Time PCR에 최적화된 버퍼를 이용하여, 비특이적 증폭을 억제해, 높은 증폭 효율, 높은 검출 감도로 Real Time PCR를 실시할 수 있다. 또, 반응 시간이 짧은 고속 PCR에도 적용가능하다. 증폭 산물 검출에는 공정법과 같은 FAM (reporter)/TAMRA (quencher)로 표지 된 Dual-Labeled probe를 채용하고 있다. Dual-Labeled probe는 5’말단을 형광 물질 (FAM 등)로, 3’말단을 quencher 물질 (TAMRA 등)로 수식한 oligonucleotide이다. Annealing 조건하에서 Dual-Labeled probe는 주형 DNA에 특이적으로 결합하지만, 형광은 quencher 에 의해서 억제된다. 신장 (extention) 반응시 Taq DNA polymerase가 가지고 있는 5’→3’ exonuclease 활성에 의해, 주형 DNA에 결합한 Dual-Labeled probe를 분해하여, quencher에 의한 억제를 없애 형광을 발하게 한다. 이 형광 강도를 측정하여 증폭 산물을 모니터 할 수 있다.
내용
Kudoa septempunctata (18S rRNA) qPCR Detection Kit (Code RR260, 20 ㎕ 반응시 50회 분량)
1. Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)(2×conc.) 500 ㎕
2. Kudoa Primer/Probe Mix (10×conc.)*1 100 ㎕
3. dH2O 1 ㎖
4. ROX Reference Dye (50×conc.)*2 20 ㎕
5. ROX Reference Dye II (50×conc.)*2 20 ㎕
6. Kudoa Positive Control (2.5×107 copies/㎕)*2 50 ㎕
7. EASY Dilution (for Real Time PCR) 1 ㎖ × 2개

*1 형광표지 probe(FAM-TAMRA 표지)를 포함하고 있으므로, 차광에 유의해 주세요.
*2 Real Time PCR 반응액(1~5)에 잘못해 혼입되면, 올바른 검출 반응을 실시할 수 없으니, 오염에 특별히 주의한다.
보존
- 20℃
Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)는 융해 후 4℃로 보존하며, 반복적인 동결 융해를 피해주십시오. . 4 ℃에서 6개월간 안정합니다.
장기 보존이 필요한 경우에는 최초 융해시 소량씩 분주하여 -20 ℃에 보관하는 것을 추천합니다.
본 제품 이외에 필요한 시약, 기기(주된 것)
Real Time PCR용 기기 및 전용 tube
    Thermal Cycler Dice Real Time System II (Code TP900/TP960)
    Thermal Cycler Dice Real Time System Lite (Code TP700/TP760)
    Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System(Life Technologies) 등
탁상용 원심분리기
200 μl, 20 μl, 10 μl 각 micropipette
Micropipette 용 tip(필터 장착 tip)
Kudoa Positive Control를 이용하는 정량 해석에 대해
본 제품에 포함되어 있는 Kudoa Positive Control은 다카라바이오에서 합성한 Kudoa septempunctata의 배열을 가지는 plasmid DNA이다.
EASY Dilution(for Real Time PCR)을 이용하여 Kudoa Positive Control을 단계 희석하여, 검량선을 작성하면 정량 해석이 가능하다.
[※ 해석법에 대해서는 공정법을 참조해 주세요.]