제품설명
Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System은 3주만에 iPS 세포로부터 간세포로 분화 유도 할 수 있는 제품이다. 본 제품은 분화 유도의 각 단계에서 필요한 배지와 ready-to-use 상태의 코팅용액을 포함하고 있다. 3 × 106개의 iPS 세포로부터 5 × 106 개 (50 cm2 면적 상당)의 간세포를 분화시킬 수 있다.
분화된 간세포는 주요한 간 마커 유전자를 발현하고, 사용한 iPS 세포에 의존한 CYP 활성을 가지고 있다. 간세포로 분화 유도 가능한 인간 iPS 세포 (ChiPSC18)는 별도로 판매하고 있다.
분화 유도를 통해서 제조된 간세포는 시중에 판매되고 있는 동결 간세포보다 장기간 배양이 가능하며, 장기 독성 시험이나 바이러스 감염 시험에도 적합하다.

[인간 iPS 세포로부터 간세포로의 분화 유도 흐름]
내용
본 제품은 Cellartis Definitive Endoderm Diff Kit with DEF-CS (Code Y30035)와 Cellartis Hepatocyte Diff Kit (Code Y30050)로 구성되어 있다.

Cellartis Definitive Endoderm Diff Kit with DEF-CS (Code Y30035)

· Differentiation media 6 종

· Coating 용액 1 개

· Cellartis DEF-CS 100 Culture System
Cellartis DEF-CS Basal Medium
100 ml
Cellartis DEF-CS COAT-1
800 μl
: 플레이트 코팅 (6 well plate 기준 약 16 well 사용가능)
DEF-CS GF-1
300 μl
 배지첨가제(Growth factor)
DEF-CS GF-2
100 μl
DEF-CS GF-3
40 μl

Cellartis Hepatocyte Diff Kit (Code Y30050)
· Hepatocyte Thawing and Seeing Medium (1)
25 ml
· Hepatocyte Progenitor Medium (2)
50 ml
· Hepatocyte Maturation Medium Base (3A)
24 ml × 2 ea
· Hepatocyte Maturation Medium Supplement (3B)
2.6 ml
· Hepatocyte Maintenance Medium (4)
50ml × 4 ea *
· Hepatocyte Coating
7.5 ml
*11일간 배양 유지 할 수 있는 용량입니다. 그 기간 이상의 배양에는 별도의 Cellartis Hepatocyte Maintenance Medium (Code Y30051)를 이용해 주십시오.
보존
· Cellartis Definitive Endoderm Diff Kit with DEF-CS (Code Y30035)
   · Differentiation media : 4 ℃
   · Coating : -20 ℃
   · Cellartis DEF-CS 100 Culture System
      DEF-CS Basal Medium (100 ml) : 4 ℃
      DEF-CS COAT-1 : -20 ℃
      DEF-CS GF-1 GF-2, GF-3 : -20 ℃
· Cellartis Hepatocyte Diff Kit (Code Y30050) : - 20 ℃


그림 1. 간세포로의 분화 유도과정시 면역조직염색 결과
Cellartis Definitive Endoderm ChiPSC18 cells과 Cellartis Hepatocyte Diff Kit을 사용하여 분화 유도한 간세포를 14일과 21일에 초기 간 마커인 HNF4α (red, nuclear)와 CK18 (green)으로 염색했다. 28일에는 간 특이적 마커인 CYP3A (red, cytoplasmic)와 Albumin (green)의 발현이 증가되고 있어 간세포가 성숙되고 있음을 확인할 수 있었다. 세포핵은 DAPI (blue)로 염색되었다.


그림 2. 간세포로의 분화 유도 과정시 유전자 발현 프로파일링
Cellartis Definitive Endoderm ChiPSC18 cells과 Cellartis Hepatocyte Diff Kit을 사용하여 분화 유도한 세포에 대해 간마커 유전자 및 CYP 유전자의 mRNA 발현량을 RT-qPCR로 분석했다. 그 결과 11일째부터 32일째까지 간세포로 분화되어있는 것을 확인할 수 있었다.


그림 3. 간세포로의 분화 유도 과정시 CYP 활성의 변화
Cellartis Definitive Endoderm ChiPSC18 cells과 Cellartis Hepatocyte Diff Kit을 사용하여 분화 유도한 세포에 대해 CYP 활성을 측정했다. 그 결과 21일째부터 32일째까지 CYP1A, CYP3, CYP2C9의 활성이 확인되었다. CYP1A은 acetaminophen, CYP3A는 1-OH-Midazolam, CYP2C9는 4-OH-Diclofenac의 생성을 측정하였다.
참고문헌
1. One Standardized Differentiation Procedure Robustly Generates Homogenous Hepatocyte Cultures Displaying Metabolic Diversity from a Large Panel of Human Pluripotent
   Stem Cells
   Asplund A, et. al. Stem Cell Rev. 2016 Feb;12(1):90-104
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