°Ô³ð ÆíÁý(Gene editing)À» ÀÌ¿ëÇÑ ¼¼Æ÷ÁÖ Á¦ÀÛ ¿¬±¸ ¼º°ú ÇмúÁö(Scientific Reports) °ÔÀç
´ÙÄ«¶ó¹ÙÀÌ¿À ÁÖ½Äȸ»ç´Â ´ç»ç°¡ ÁøÇàÇϰí ÀÖ´Â CRISPR/Cas9 ½Ã½ºÅÛÀ» ÀÌ¿ëÇÑ °Ô³ð ÆíÁý ¿¬±¸ °³¹ßÀÇ ¼º°ú°¡ ±¹Á¦ ÇмúÁö Scientific Reports ¿Â¶óÀÎ ÆÇ¿¡
°ÔÀçµÇ¾ú±â¿¡ À̸¦ ¾Ë·Áµå¸³´Ï´Ù.
Highly efficient genome editing for single-base substitutions using optimized ssODNs with Cas9-RNPs
Scientific Reports,(2019) 9:4811
https://rdcu.be/brC6C
• °Ô³ð ÆíÁýÀ» ÀÌ¿ëÇÏ¿© 1¿°±â ġȯ(single-base substitutions)À» À§ÇÑ À¯ÀüÀÚ Á¶ÀÛÀ» ÇÒ ¶§, donor DNA·Î »ç¿ëµÇ´Â single- stranded oligo DNA (single-stranded oligo-deoxynucleotides(ssODNs))ÀÇ ¼³°è¸¦ ÃÖÀûÈÇÏ¿©, °íÈ¿À²·Î ¿øÇÏ´Â À¯ÀüÀÚ°¡ º¯ÀÌ(1 ¿°±â ġȯ)µÈ ¼¼Æ÷¸¦ ÃëµæÇϴµ¥ ¼º°øÇÏ¿´´Ù.
• Single strand guide RNA (sgRNA)¿Í Cas9 ´Ü¹éÁú·Î ÀÌ·ç¾îÁø RNP º¹ÇÕü¸¦ Á÷Á¢ ¼¼Æ÷¿¡ µµÀÔÇÏ´Â °Ô³ð ÆíÁýÀº Á¾Àü¿¡ ÁÖ·Î »ç¿ëµÇ°í ÀÖ´Â Çö󽺹̵å DNA¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© sgRNA¿Í Cas9À» ¹ßÇöÇÏ´Â °Ô³ð ÆíÁý¿¡ ºñÇØ, ´õ È¿À²ÀûÀ¸·Î ¸ñÀûÇÏ´Â 1 ¿°±â°¡ ġȯµÈ °Ô³ð ÆíÁý ¼¼Æ÷¸¦ ȹµæÇϴµ¥ È¿°úÀûÀ̾úÀ½ È®ÀÎÇÏ¿´´Ù.
• iPS ¼¼Æ÷¿ë ¹èÁö Cellartis¢ç iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS¢â Culture Media Kit(Y30021)Àº Àΰ£ iPS ¼¼Æ÷ÀÇ °Ô³ð ÆíÁý¿¡ ÇÊ¿äÇÑ ´ÜÀÏ ¼¼Æ÷ º¹Á¦(single cell cloning) °øÁ¤¿¡ ÃÖÀûÀ̾ú´Ù.
°Ô³ð ÆíÁý(Gene editing)Àº °Ô³ðÀÇ Ç¥Àû À¯ÀüÀÚ¸¦ ÀÎÀ§ÀûÀ¸·Î ¼öÁ¤(±³Á¤)ÇÏ´Â ÃÖ½ÅÀÇ À¯ÀüÀÚ Á¶ÀÛ ±â¼úÀÔ´Ï´Ù. À̹ø ¿¬±¸ ¼º°úÀÎ ÃÖÀûÈµÈ single strand oligo DNA(ssODNs)¿Í Cas9-RNP º¹ÇÕü¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ ±â¼úÀº Áö±Ý±îÁö °Ô³ð ÆíÁý ¼º°ø·üÀÌ ¸Å¿ì ³·´Ù°í ¾Ë·ÁÁ® ÀÖ´Â 1¿°±â ġȯ(single-base substitutions)À¯ÀüÀÚ
º¯À̸¦ °¡Áø ¼¼Æ÷ Á¦ÀÛ¿¡ ¸Å¿ì È¿°úÀûÀÔ´Ï´Ù. ÀÌ ±â¼úÀº ´ç»çÀÇ °Ô³ð ÆíÁý ºÐ¾ßÀÇ ¿¬±¸¿ë Á¦Ç°À̳ª ¼öŹ ¼ºñ½º¿¡¼ ÀÌ¹Ì Àû¿ëÇϰí ÀÖÀ¸¸ç, ¿¬±¸ ºÐ¾ß´Â ¹°·Ð ÀÀ¿ë ºÐ¾ß¿¡¼µµ Æø ³ÐÀº Ȱ¿ëÀÌ ±â´ëµË´Ï´Ù.
´ç»ç´Â °Ô³ð ÆíÁýÀ» ºñ·ÔÇÑ ÃÖ÷´Ü »ý¸í°úÇÐ ¿¬±¸¿ë Á¦Ç° ¹× ¼öʼºñ½º ¶óÀξ÷¿¡ ³»½ÇÀ» ±âÇØ »ý¸í°úÇÐ ¿¬±¸¸¦ Áö¿øÇϰí, ¹ÙÀÌ¿À»ê¾÷ Áö¿ø»ç¾÷ÀÇ ¹ßÀüÀ»
µµ¸ðÇØ ³ª°¡°Ú½À´Ï´Ù.