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신규 유전자 또는 발현량에 차이가 있는 유전자의 분리에 이상적인

Clontech PCR-Select cDNA Subtraction Kit

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Clontech	637401	Clontech PCR-Select cDNA Subtraction Kit	7 회 (Package)	2,226,000원

Product index

Overview
High fidelity PCR: PrimeST..
Standard PCR: Ex, LA, rTaq..
Direct PCR: MightyAmp
Dye가 포함된 premix
특수 PCR (Epigenetics, UNG..
PCR Enzyme (Clontech)
DNA PCR 관련 제품
RT-PCR 관련 제품
Mutagenesis
- Diversify PCR Random M..
PCR Subtraction 관련 제품
PCR 장치
PCR Accessory Products
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- TaqStart Antibody
Whole Genome SNP Detection
- TITANIUM DNA AMPLIFICA..

신규 유전자, 발현량에 차이가 있는 유전자 분리에 이상적
- 희소한 전사 생성물을 1,000 배 이상으로 농축
- 필요한 poly A+ RNA는 단 2 ㎍
- cDNA subtraction 과정이 단 3~4 일만에 완료
Clontech PCR-select cDNA subtraction Kit을 사용하면 발현량에 차이가 있는 특이적 유전자(2 종류의 mRNA집단 한 측에서 발현하고 있지만 다른 측에서는 감소 또는 발현하지 않는 유전자 ; 1~4)의 선택적 증폭을 효율적으로 실시할 수 있다. 일반적으로 희소한 전사 생성물의 취득은 상당히 곤란하지만, 본 방법은 이러한 cDNA 동정에 특히 적합하다. Clontech PCR-select법은 single strand cDNA와 double strand cDNA의 물리적 분리를 필요로 하는 다른 방법과는 달리, 목적 서열만을 지수적으로 증폭할 수 있다. 본 방법은 다음과 같은 다양한 장점을 가지고 있다. - 조작단계가 적고 직접적인 방법 : PCR-select법에서는 subtraction hybridization 및 특이적 발현 유전자 증폭의 일련의 조작 과정에서 유전자 subtraction이 이루어진다. 물리적 분리는 필요하지 않다. - 희소한 전사 생성물을 1,000 배 이상으로 농축 : PCR-select에서는 전사 생성물의 존재율 보정과 subtraction 조작을 동시에 한다. 그 결과, 특이적으로 발현된 희소한 전사 생성물을 얻을 확률이 상당히 높아진다. - 단 2 ㎍의 poly A+ RNA로 subtraction이 가능 : PCR-select에서 필요한 poly A+ RNA량은 단 2 ㎍이므로, 조제가 곤란한 소량의 RNA 시료에는 특히 유용하다. total RNA가 ng 정도밖에 없는 경우는 super SMART PCR cDNA synthesis Kit을 사용하여 clontech PCR-select cDNA subtraction에 사용하는 고품질의 cDNA를 제작해야 한다.

그림1. Southern blot 분석

Clontech PCR-select cDNA subtraction Kit에는 cDNA 합성 7 회분 시약과 user manual이 첨부되어 있다. LD(Long Distance) PCR용 PCR 효소 mix는 별도로 준비해야 한다. Clontech에서는 advantage 2 polymerase mix(Cat. No. 639201) 사용을 권장한다.

구성물

AMV reverse transcriptase
cDNA synthesis primer
First-strand buffer
Second-strand enzyme cocktail
Second-strand buffer
T4 DNA polymerase
Rsa I
Rsa I restriction buffer
T4 DNA ligase
Adaptors 1 & 2R
DNA ligation buffer
Dilution buffer
Hybridization buffer
PCR primer 1
Nested PCR primers 1 & 2R
PCR control subtracted cDNA
Control poly A+ RNA
Control DNA
G3PDH 5' & 3' primers
dNTP mix
EDTA/glycogen mix
Ammonium acetate
Sterile H2O
User manual(PT1117-1)

보존

-70 ℃ : Control poly A+ RNA
실온 : hybridization buffer
-20 ℃ : 이외의 모든 시약

적용분야

Subtractive hybridization
유전자 특정
특이적 유전자 발현해석
유전자 발현해석
cDNA subtraction

참고문헌

1. Diatchenko, L., et al.(1996) Proc.Natl.Acad.Sci. USA 93:6025-6030.
2. Gurskaya, N. G., et al.(1996) Anal. Biochem. 240:90-97.
3. PCR-select cDNA subtraction Kit(October 1995) Clontechniques X(4):2-5.
4. Diatchenko, L., et al.(1998) In RT-PCR methods for gene cloning and analysis, Eds. Siebert, P. D., et al.(BioTechniques books, MA), pp.213-239.

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