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 제목 : [제품소개] In-Fusion® Cloning 실험원리 간단 정리
작성일 : 2024.04.19
 작성자 : 다카라코리아

 

[In-Fusion® Cloning]

 

In-Fusion® Cloning vector insert를 같은 제한효소로 절단한 뒤 ligase로 연결하는 기존의 Cloning 방법과는 다른 방법입니다. 

 

아래 그림과 같이 Cloning 하고자 하는 vector insert의 양 끝의 15bp의 서열이 일치하기만 하면 되기 때문에 vector나 insert의 제한효소 위치를 고려하지 않아도 됩니다.

 

 

[In-Fusion® Cloning 실험원리]


1. Insert PCR로 준비하는 과정에서 primer 5’ 말단에 사용하고자 하는 선형화 된 vector*의 말단 서열을 추가해서 증폭
*inverse PCR
또는 제한효소로 선형화


2. In-Fusion® enzyme으로 선형화 된 vector insert의 상동서열끼리 연결
-
효소의 3’ → 5 exonuclease 활성으로 sticky end 형성
-
이후 15bp 상동서열의 sticky 부분이 상보적으로 결합


3. Cloning 과정에 vector insert 사이에 남은 nick comp.cell 안에서 수복


위 그림처럼 Cloning 과정에서 제한효소 서열이 관여하지 않기 때문에 ligase를 사용한 Cloning처럼 제한효소 인식 서열을 고려할 필요가 없습니다.

 

 

실험의 전체적인 과정 및 원리는 아래의 동영상에서도 확인하실 수 있습니다.

-       In-Fusion® Cloning mechanism

In-Fusion® Cloning을 위한 primer 디자인 온라인 툴도 쉽게 활용해보세요!

-       In-Fusion® primer design tool

 

 

 

15분만에 완성되는 편리하고 정확한 In-Fusion® Snap Assembly Master Mix (Code 638947)

 

뛰어난 Nick 수복 능력으로 In-Fusion® 실험 시 가장 높은 효율을 보이는 Stellar™ Competent Cells (Code 636763) 과 함께 사용하여 cloning 효율을 향상시킬 수 있습니다.

제품 문의사항은 고객지원 (02-2081-2510, support@takara.co.kr) 로 연락 바랍니다. 

감사합니다.

다카라코리아 드림. 

 

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