• 제한효소 인식서열 일정 염기 바깥 DNA를 절단하는 Type IIS 제한효소 (Isochizomer)
• 비대칭의 이중가닥 DNA서열 인식
• Translation 효율을 높이기 위해 in vitro transcription시 PolyA 서열 이외에 불필요한 염기가 없는 주형 DNA를 제작할 때 활용

제품설명

BspQ I은 비대칭의 특정 이중가닥 DNA서열을 인식하여 일정 염기 바깥의 DNA를 절단하는 Type IIS 제한효소이다 (Isochizomer). in vitro transcription시, mRNA 합성을 위한 주형 plasmid에 BspQ I 인식서열을 추가한 후, BspQ I을 처리하면 PolyA 서열 이외에 불필요한 염기가 없는 mRNA를 합성할 수 있다.^*1
*1 mRNA 합성을 위한 주형 DNA를 제작할 때 PolyA 서열 뒤에 추가 염기가 남는 경우 mRNA의 translation 효율이 저하되므로 염기가 남지 않도록 설계하는 것이 중요하다 (그림 1).


그림 1. Poly A 서열 뒤에 추가되는 여분의 염기 수에 따른 mRNA translation 효율 비교
3 종류의 제한효소 (BamH I, Hind III, BspQ I)로 선형화된 IVT용 plasmid로 mRNA 합성 후 TransIT^®-mRNA Transfection Reagent (Code MIR 2250)를 사용해 HEK293T 세포에 transfection 하였다. 그 결과, FLuc positive control과 비교해서 23개의 추가 염기가 남아있는 mRNA는 translation 효율이 크게 저하되었다.
반면에 5개 이하의 염기가 남은 경우 모두 비슷한 translation 효율을 나타냈지만, 여분의 염기가 적을수록 mRNA의 translation 효율이 더 높은 경향을 보였다. 추가 염기가 없을 때 translation 효율이 가장 높기에 mRNA 합성을 목적으로 하는 주형 제작 시 BspQ I과 같은 Type IIS 제한 효소의 사용을 권장한다.
※ Hind III제한효소를 사용해 3개 이하의 잔여 염기가 남는 경우, translation 효율이 소폭 감소 되었지만 여분 염기가 없는 경우와 큰 차이를 보이지는 않는다.

용도

내용

보존 -20℃

기원

일반적인 반응 조건

반응 온도

주의사항

열 실활 조건

메틸화의 영향

Star 활성

관련제품