´Ý±â
TaKaRa
Á¦Ç°¸í/Á¦Ç°ÄÚµå
Å°¿öµå°Ë»ö
°Ë»ö
´Ý±â
  • °í°´Áö¿ø 
  • ¾÷¹«¾È³»¦¢Á¦Ç°¹®ÀÇ
  • ÀüÈ­¹øÈ£¦¢02-2081-2510
  • Email     ¦¢support@takara.co.kr
  • ´ëÀüÁö»ç 
  • ¾÷¹«¾È³»¦¢´ëÀü/ÃæûÁö¿ª ÁÖ¹®, Á¦Ç°¹®ÀÇ
  • ÀüÈ­¹øÈ£¦¢042-828-6525
  • Email     ¦¢tkbd@takara.co.kr
  • ¾÷¹«½Ã°£¾È³»
  • [ Æò¡¡¡¡ÀÏ ] 09 : 00 ~ 18 : 00 ¦¢ [ Á¡½É½Ã°£ ] 12 : 00 ~ 13 : 00
  • Å䡤ÀÏ¿äÀÏ, °øÈÞÀÏÀº ÈÞ¹«ÀÔ´Ï´Ù.
Home > ÀüÁ¦Ç°º¸±â > PCR > Overview > PCR¡¢LA PCR¢â¡¢Hot Start PCR¿¡ ´ëÇÏ¿©

PCR¡¢LA PCR¢â¡¢Hot Start PCR¿¡ ´ëÇÏ¿©

-
PCRÀÇ ¿ø¸®
PCR (Polymerase Chain Reaction) ¹ýÀº
¡¤ DNA °¡´ÚÀÇ ¿­º¯¼º (denaturation step)
¡¤ ÇÁ¶óÀÌ¸Ó¿Í annealing (annealing step)
¡¤ Polymerase¿¡ ÀÇÇÑ DNA ÇÕ¼º ½ÅÀå (extension step)

À» ¹Ýº¹ÇÏ¿© ½Ç½ÃÇÔÀ¸·Î½á in vitro¿¡¼­ DNA¸¦ ÁõÆøÇÏ´Â ¹æ¹ýÀÌ´Ù(±×¸² 1). ÀÌ ¹æ¹ýÀ» »ç¿ëÇϸé DNA¸¦ ¼ö½Ã °£ ³»¿¡ Àû¾îµµ 105¹è·Î ÁõÆø½Ãų ¼ö ÀÖ´Ù. TaKaRa Taq (TaKaRa Code R001)Àº Thermus aquaticus YT-1 ÁַκÎÅÍ DNA polymerase À¯ÀüÀÚ¸¦ Ŭ·Î´×ÇÏ¿© ±× À¯ÀüÀÚ¸¦ µµÀÔÇÑ ÀçÁ¶ÇÕü ´ëÀå±ÕÀ» ÀÌ¿ëÇØ ´ë·® ¹ßÇö ÇÏ¿©, °íµµ·Î Á¤Á¦ÇÑ 94 kDaÀÇ ³»¿­¼º DNA polymerase·Î¼­ õ¿¬ÀÇ Taq DNA polymerase¿Í °°Àº ±â´ÉÀ» °®°í ÀÖ´Ù.
±×¸² 1 PCR¹ý¿¡ ÀÇÇÑ DNA ÁõÆø °úÁ¤

±×¸² 1 PCR¹ý¿¡ ÀÇÇÑ DNA ÁõÆø °úÁ¤

Step 1 : ÇÁ¶óÀ̸Ó, dNTP, ³»¿­¼º DNA polymerase¸¦ ÇÔÀ¯ÇÑ ¹ÝÀÀ¾× Áß¿¡ ¸ñÀû ds DNA ´ÜÆíÀ» ¿­º¯¼ºÇÑ´Ù(94¡É, 30 sec).
Step 2 : ¿­º¯¼º¿¡ ÀÇÇØ »ý±ä ÁÖÇü ss DNA¿¡ ÇÁ¶óÀ̸Ӹ¦ annealingÇÑ´Ù (55¡É, 30 sec).
Step 3 : DNA polymerase¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© »óº¸Àû °¡´ÚÀÇ DNA¸¦ ÇÕ¼ºÇÑ´Ù (72¡É, 1 min).
Step 4 : ÁõÆø »ê¹°ÀÎ ds DNA¸¦ Àç¿­º¯¼ºÇÏ¿© ss DNA¸¦ Çü¼ºÇÑ´Ù (step 1·Î µÇµ¹¾Æ °£´Ù).
Step 1~4¸¦ 1 cycle·Î ÇÏ¿© 25~30 cyclesÀ» ¹Ýº¹ÇÑ´Ù. ´Ü, ¸ñÀû DNA ´ÜÆí¿¡ µû¶ó ÁõÆøÀÇ ÃÖ´ë È¿À²À» ¾òÀ» ¼ö ÀÖ´Â Á¶°ÇÀÌ ´Ù¸£¹Ç·Î ¸ñÀû DNA ´ÜÆí¿¡ µû¶ó PCR Á¶°ÇÀ» º¯°æÇÒ ÇÊ¿ä°¡ ÀÖ´Ù.
1. Á¤È®¼º(Fidelity)
Taq DNA polymerase´Â ÀϹÝÀûÀ¸·Î Á¤È®¼ºÀÌ ±×´ÙÁö ³ôÁö ¾ÊÀº °ÍÀ¸·Î ¾Ë·ÁÁ®, PCR ÁßÀÇ misincorporation (mismatching)ÀÌ ¹®Á¦°¡ µÇ´Â °æ¿ì°¡ ÀÖÀ¸¹Ç·Î PCR Ŭ·Î´×, º¯À̵µÀÔ µîÀÇ °æ¿ì¿¡´Â ÁÖÀÇ°¡ ÇÊ¿ä ÇÏ´Ù.
2. ÁõÆø´ÜÆíÀÇ ±æÀÌ
Taq DNA polymerase¸¦ »ç¿ëÇÑ PCRÀº Åë»ó ¼ö kbÀÇ DNA¸¦ ÁõÆøÇϳª, 10 kb¸¦ ³Ñ´Â ´ÜÆíÀÇ ÁõÆøÀº ¾î·Á¿î °ÍÀ¸·Î ¾Ë·ÁÁ® ÀÖ´Ù. À̴ ƯÈ÷ mapping µîÀÇ °Ô³ð Çؼ®¿¡ PCR¹ýÀ» ÀÌ¿ëÇϴµ¥ Àå¾Ö°¡ µÇ¾î ¿Ô´Ù.
¶Ç Ŭ·Î´× µî PCR ÀÌÈÄÀÇ ½ÇÇèÀ̳ª °í°¨µµ¸¦ ¿ä±¸ÇÏ´Â ½Äǰȯ°æÀ§»ý °Ë»ç µî¿¡ À־´Â ÁõÆø·®À» ´Ã¸®´Â °ÍÀÌ ¸Å¿ì Áß¿äÇÏ´Ù.
TaKaRa¿¡¼­´Â ÀÌ¿Í °°Àº ÇѰ踦 ±Øº¹ÇÏ°íÀÚ polymerase/¹öÆÛ/¹ÝÀÀÁ¶°ÇÀ» Á¾ÇÕÀûÀ¸·Î °ËÅäÇÑ °á°ú 40kbÀÇ DNA¸¦ Á¤È®È÷ ±×¸®°í º¸´Ù ¸¹Àº ¾çÀ¸·Î ÁõÆøÇÒ ¼ö ÀÖ´Â PCR ±â¼ú (TaKaRa Ex Taq, TaKaRa LA Taq) Áï, LA PCR technology (LA=long and accurate)¸¦ °³¹ßÇÏ¿´´Ù. ÀÌ LA PCR ±â¼úÀº PCRÀÇ ÀÀ¿ëºÐ¾ß¸¦ ´õ¿í È®´ëÇÏ´Â °ÍÀ¸·Î °Ô³ð Çؼ®, À¯ÀüÀÚ Áø´Ü, ±ä ´ÜÆíÀÇ Å¬·Î´× ±×¸®°í º¯À̵µÀÔ µî¿¡ Æø³Ð°Ô ÀÌ¿ëµÇ°í ÀÖ´Ù.


LA PCRTMÀÇ ¿ø¸®
LA PCR¿¡ À־ ÇÙ½ÉÀÌ µÇ´Â °ÍÀº È¿¼ÒÀÌ´Ù. TaKaRa Ex Taq, TaKaRa LA TaqÀº 3¡¯¡æ 5¡¯ exonuclease È°¼º (proofreading È°¼º)À» °®´Â ³»¿­¼º DNA polymeraseÀÌ´Ù. À߸øµÈ ¿°±â°¡ µµÀÔµÇ¸é ±× ÀÌÈÄÀÇ ¹ÝÀÀ¼ºÀÌ ±Ø´ÜÀûÀ¸·Î ³ªºüÁö´Âµ¥, À̸¦ 3¡¯¡æ 5¡¯ exonuclease È°¼º¿¡ ÀÇÇØ Á¦°ÅÇÏ¿© ¹ÝÀÀÀ» ¼øÁ¶·Ó°Ô ÁøÇà½ÃÅ´À¸·Î½á °á°úÀûÀ¸·Î ±ä ´ÜÆíÀÇ DNA¸¦ ÁõÆøÇÒ ¼ö ÀÖ°Ô µÈ´Ù (±×¸² 2).
±×¸² 2 LA PCRÀÇ ¿ø¸®

±×¸² 2 LA PCRÀÇ ¿ø¸®

1) Barnes, W. M. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91, 2216-2220.
2) Cheng, S. et al. ( 1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91, 5695-5699.
3) Cheng, S., Highchi, R. and Stoneking, M. (1994) Nature Genet, 7, 350-351.
4) Cheng, S. et al. (1994) Nature, 369, 684-685.
5) Saiki, R. K., Gelfand, D. H., Stoffel, S. J., Higuchi, R., Horn, G. T., Mullis, K. B. and Erlich, H. A. (1988) Science, 239, 487-491.
6) Scharf, S. J., Horn, G. T. and Erlich, H. A. (1986) Science 233, 1076-1078.
7) Gyllensten, U. B. and Erlich, H. a. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85, 7652-7656.
8) Kawasaki, E. S., Clark, S. C., Coyne, M. Y., Smith, S. D., Champlin, R., White, O. N.and McCormick, F. P. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85, 5698-5702. 9) Lawyer, F. C., Stoffel, S., Saiki, R. K., Myambo, K. B., Drummomd, R. and Gelfand, D. H. (1988) J. Biol. Chem, 264, 6427-6437.


Hot Start PCR
Hot Start PCRÀº PCRÀÇ Ã¹¹ø° cycle¿¡¼­ÀÇ misprimingÀ̳ª primer dimer À¯·¡ÀÇ ºñƯÀÌÀû ÁõÆøÀ» ¹æÁöÇÏ°í, ¸ñÀû ´ÜÆíÀÇ ÁõÆøÈ¿À²À» ³ôÀ̴µ¥ È¿°úÀûÀÌ´Ù. TaKaRa Taq (Hot Start Version), TaKaRa Ex Taq (HotStart Version), TaKaRa LA Taq (Hot Start Version) Àº anti-Taq Ç×ü¿Í °áÇÕ½ÃŲ Hot Start¿ëÀÇ PCR È¿¼Ò·Î ÃÖÃÊÀÇ ¿­º¯¼º (step 1)¿¡¼­ Ç×ü°¡ º¯¼ºµÇ¾î È¿¼Ò·Î ºÎÅÍ ºÐ¸®µÉ ¶§±îÁö polymerase È°¼ºÀÌ ¾ïÁ¦µÈ´Ù.
±×¸² 3 Hot Start PCRÀÇ ¿ø¸®

±×¸² 3 Hot Start PCRÀÇ ¿ø¸®