Q1. DEF-CS system에서 배양한 human iPSC의 특징은 무엇인가요?
DEF-CS system에서 배양한 human iPSC는 일반적으로 flow cytometer로 확인하면 98% 이상이 Oct-4 positive입니다. 또한 일반적인 pluripotency marker인 Oct-4, NANOG등의 transcription factor와 SSEA-4, TRA-1-60, TRA-1-81등의 surface marker를 발현합니다. 반면 배양중에 SSEA-1 같은 differentiation maker는 발현하지 않고, 배양 이후 in vitro 및 in vivo에서 세 종류의 삼배엽으로 잘 분화가 되는 것을 확인했습니다.

Q2. DEF-CS 500 system는 어떤 시약으로 구성되어 있나요?
DEF-CS system에는 human iPSC 배양에 필요한 모든 시약이 포함되어 있습니다. 여기에는 3종류의 additive와 matrix solution이 있고, 이 matrix solution은 cell 부착을 위한 culture vessel 코팅용으로 사용합니다. 단, 계대배양을 위한 enzyme과 buffer는 포함되어 있지 않습니다 (TrypLE Select Enzymes (Cat. No. 12563029, Life Technologies) 추천; 다른 enzyme은 별도의 최적화 후 사용 가능).

Q3. 배지의 조성이 어떻게 되나요?
DEF-CS Basal Medium은 serum free, feeder free의 배지입니다. 다만, 정확한 조성은 공개되어 있지 않습니다. 또한 같이 제공되는 3종류의 additive와 matrix solution 역시 성분이 공개되어 있지 않습니다.

Q4. 계대배양시 어떤 enzyme을 사용하면 되나요?
DEF-CS system은 enzyme을 사용한 single cell 계대배양 및 seeding 방법을 채택했습니다. 이를 위해 TrypLE Select Enzyme (Cat. No. 12563029, Life Technologies) 사용을 추천 합니다. 다른 enzyme은 별도의 최적화 후 사용이 가능합니다.

Q5. Basal medium에 항생제가 포함되어 있나요?
네, Basal medium에는 penicillin과 streptomycin이 포함되어 있습니다.

Q6. 왜 DEF-CS GF-3는 전체 DEF-CS Basal Medium보다 적게 들어있나요?
DEF-CS GF-1 과 DEF-CS GF-2는 배지교환과 계대배양시 basal medium에 추가해 사용합니다. 반면, DEF-CS GF-3는 평소에는 사용하지 않다가 계대배양하는 때만 사용합니다. 따라서 사용량이 상대적으로 적기 때문에 조금 들어있습니다.


Q1. DEF-CS system으로 얼마나 많은 cell을 배양할 수 있나요?
DEF-CS 500 Kit (500 ㎖ basal medium 포함) 1개는 1.5~3.0 x 10⁵ cells/㎝²로 대략 600 ㎝² plate에 세포를 배양하기에 충분한 양입니다. 이는 24개의 T25 culture flask, 8개의 T75 culture flask, 4개의 T150 culture flask와 일치합니다.

Q2. 세포의 growth rate는 보통 어느정도인가요?
DEF-CS system에서 배양된 human iPSC의 일반적인 generation time (세포의 수가 2배가 되는데 필요한 시간)은 36 ± 5시간 입니다.

Q3. 배지 교환은 얼마마다 한번씩 진행해야 하나요?
배지교환은 매일하는 것을 권장합니다. 다만, cell density가 낮은 경우 이틀에 한번씩 교환하는 것도 가능합니다. 그러나 계대배양을 시작하기 전날과 진행한 다음날에는 꼭 배지를 교환해야 합니다.

Q4. 계대배양은 얼마마다 한번씩 진행해야 하나요?
대부분의 human iPSC는 3~4일에 한번씩 계대배양이 필요합니다. 당사에서는 아래와 같은 주간 스케줄을 추천합니다. 이때 seeding은 4.0~5.0 x 10⁴ cells/㎝²으로하고 계대배양은 1.5~3.0 x 10⁵ cells/㎝²일 때 진행하는 것을 권장합니다.

월	화	수	목	금	토	일
계대배양	배지교환	배지교환	계대배양	배지교환		배지교환

Q5. DEF-CS system에서 배양된 human iPSC는 몇 passage까지 계대배양이 가능한가요?
세포들은 적어도 25 passage까지 pluripotency와 normal karyotype을 유지합니다. 이 값은 세포의 수가 대략 2⁶⁵배까지 분열된 경우와 같습니다.

Q6. Culture system의 automation이 가능한가요?
예, DEF-CS system은 single cell suspension의 seeding이 가능하여 over seeding 및 harvesting density를 조절해 일관된 stem cell population을 유지하는 것이 가능합니다. 또한 cell selection이 필요 없기 때문에 automation을 통해 cell을 대량 생산하는 데 활용할 수 있습니다.