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제품설명
TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent는 expression vector와 packaging plasmid를 HEK293 타입의 패키징 세포로 효율적으로 도입하여, AAV 또는 Lentivirus의 생산율을 높여주는 transfection 시약이다.
VirusGEN® AAV Transfection Kit및 VirusGEN® LV Transfection Kit는 TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent를 기반으로 plasmid 도입 효율를 높이기 위한 enhancer / complex formation 시약이 추가된 kit로 각각 AAV와 Lentivirus의 효율적인 생산을 위해 최적화된 제품이다.
TransIT-VirusGEN® SELECT Transfection Reagent는 연구용 시약인 TransIT-VirusGEN® 과 조성은 같지만 전임상용 바이러스 벡터 제작을 위한 transfection 시약으로 사용할 수 있도록 품질 보증 시험을 완료하였다. ([Example Certificate of Origin (PDF) | Example Certificate of Analysis (PDF) | Example BSE TSE Statement (PDF)])
TransIT-VirusGEN® SELECT은 PEI, PEIpro® reagent보다 뛰어난 성능으로, 간단하고 합리적인 비용으로 바이러스를 대량 생산할 수 있다.
TransIT-VirusGEN® GMP Transfection Reagent는 USP <1043>에 따라 세포, 유전자 및 조직 공학 제품 개발 시 보조시약으로 사용할 수 있어, 임상 시험 또는 상업적인 바이러스 생산 시 사용을 권장한다.
TransduceIT™ Transduction Reagent는 hexadimethrine bromide 로, 이를 사용하면 lentivirus 또는 retrovirus transduction 효율을 높일 수 있다.
그림1. 타사대비 높은 AAV functional titer
Suspension 형태로 배양한 Freestyle 293-F세포 (FreeStyle F17 Medium에서 배양)(A)와 Adherent 형태로 배양한 293T/17세포(B)에 Trans IT-VirusGEN® Transfection Reagent (reagent : DNA (vol : wt) = 2 : 1), 타사 B4, 타사 B5, 타사 C3 (25kDa PEI)를 사용하여 pAAV-hrGFP, pAAV-RC, pAAV-Helper (1 : 1 : 1 ratio, 1.5 ㎍/㎖, Agilent Technologies)를 transfection 하여 바이러스를 생산하였다. 생산된 바이러스는 HT1080세포에 감염, 48시간 뒤 GFP발현을 유세포측정기로 측정하였다.
*Functional titer는 GFP 발현세포가 20% 미만인 virus 희석액으로부터 측정하였고, error bar는 3반복 실험군의 표준편차이다.
그림2. 타사대비 높은 Lentivirus functional titer
Suspension 형태로 배양한 Freestyle 293-F세포 (FreeStyle F17 Medium에서 배양)(A), Adherent 형태로 배양한 293T/17세포(B)에 TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent (reagent : DNA (vol : wt) = 3 : 1), 타사 B4, 타사 B5, 타사 C3 (25kDa PEI)를 사용하여 pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP transfer vector, MISSION® Lentivirus Packaging Mix (1 : 1 ratio, 1 ㎍/㎖)을 transfection 하였다. Transfection된 세포의 배양 상층액을 0.45 ㎛ 필터로 여과하여 8 ㎍/㎖TransduceIT™ 과 함께 293T/18에 감염시켰다. 72시간 뒤 GFP발현을 유세포측정기로 측정하였다.
*Functional titer는 GFP 발현세포가 20% 미만인 virus 희석액으로부터 측정하였고, error bar는 3반복 실험군의 표준편차이다
그림3. 다양한 AAV 생산 스케일에 적용 가능
Suspension 형태로 배양한 FreeStyle 293-F 세포 (FreeStyle F17 Medium에서 배양)(A), Adherent 형태로 배양한 293T / 17 세포(B)에 TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent를 사용하여 pAAV -hrGFP, pAAV-RC, pAAV-Helper (1 : 1 : 1 ratio, 1.5 ㎍/㎖, Agilent Technologies)를 transfection하여 바이러스를 생산하였다 (reagent : DNA (vol : wt) = 2 : 1). 생산된 바이러스는 HT1080 세포에 감염, 48 시간 뒤에 GFP 발현을 유세포측정기로 측정하였다.
*Functional titer는 GFP 발현세포가 20% 미만인 virus 희석액으로부터 측정하였고, error bar는 3반복 실험군의 표준편차이다.
보존
TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent: -10~-30℃ 보존
(SELECT, GMP 모두 동일)
관련제품
- 다양한 Serotype의 vector system: AAVpro® Helper Free System (AAV1, 2, 5, 6)
- CRISPR/Cas9 Vector System: AAVpro® CRISPR/Cas9 Helper Free System (AAV2)
- AAV extraction: AAVpro® Extraction Solution
- Cell에서 정제: AAVpro® Purification Kit (All Serotypes)
- 배양배지와 cell에서 모두 정제: AAVpro® Cell & Sup. Purification Kit Maxi (All Serotypes)
- AAV titration: AAVpro® Titration Kit (for Real Time PCR)
- Packaging (293T Cell Line): AAVpro® 293T Cell Line
- Tat-independent Lentivirus system
: LVpro Packaging Mix (pLVpro-MSCV Vector)
: LVpro Packaging Mix (pLVpro-EF1α Vector)
: LVpro Packaging Mix (pLVpro-MSCV-ZsGreen1 Vector)
- 고효율 감염을 위한 Lentivirus transduction enhancer
: RetroNectin® (Recombinant Human Fibronectin Fragment)
: RetroNectin®GMP grade (Recombinant Human Fibronectin Fragment CH-296)
