Á¦Ç° ¼³¸í
TaKaRa PCR Carryover Prevention KitÀº PCRÀÇ ±âÁú·Î dTTP ´ë½Å¿¡ dUTP¸¦ »ç¿ëÇÑ ÈÄ, ¿ì¶ó½Ç(uracil)À» Æ÷ÇÔÇϰí ÀÖ´Â DNA¸¦ ºÐÇØÇÏ´Â È¿¼ÒÀÎ UNG(Uracil-N-glycosylase)¸¦
ÀÌ¿ëÇÏ¿©, ¾Õ¼ ÁøÇàµÈ PCR ÁõÆø »ê¹°ÀÇ carryover¿¡ ÀÇÇÑ °¡Â¥ ¾ç¼º¹ÝÀÀÀ» ¹æÁöÇϱâ À§ÇÑ Á¦Ç°ÀÌ´Ù. PCRÀü¿¡ UNG¸¦ ¹ÝÀÀ½Ã۸é, ¿ì¶ó½ÇÀ» Æ÷ÇÔÇÑ PCR »ê¹°ÀÌ È¥ÀԵǾ
UNG¿¡ ÀÇÇØ ºÐÇØµÇÁö¸¸, ÁÖÇü DNA´Â ºÐÇØµÇÁö ¾Ê±â ¶§¹®¿¡, carryoverÀÇ ¿µÇâÀ» ¹ÞÁö ¾Ê°í PCR ÁõÆøÀ» ½Ç½ÃÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù.
UNG´Â ¿ì¶ó½ÇÀ» Æ÷ÇÔÇϰí ÀÖ´Â single strand DNA¿Í double strand DNA´Â °¡¼öºÐÇØ ÇÏÁö¸¸, RNA¿¡´Â ÀÛ¿ëÇÏÁö ¾Ê´Â´Ù. º» Á¦Ç°¿¡´Â UNG¿Í ÇÔ²² dUTP¸¦ Æ÷ÇÔÇÑ dNTP Mixture¿Í
MgCl2 ¿ë¾×ÀÌ Æ÷ÇԵǾî ÀÖ´Ù. TaKaRa Taq Hot Start Version(Code R007A/B)µîÀÇ Pol IÇü PCR È¿¼Ò¿Í Á¶ÇÕÇØ »ç¿ëÇÑ´Ù.
UNG¿¡ ÀÇÇÑ ºÐÇØ
PCR ¹ÝÀÀÀü¿¡ 25¡É, 10 ºÐ°£ incubationÇϸé, PCR ¹ÝÀÀ¾×¿¡ È¥ÀԵǾî ÀÖ´Â ¿ì¶ó½ÇÀ» Æ÷ÇÔÇÑ PCR »ê¹°¿¡´Â UNG¿¡ ÀÇÇÑ °¡¼öºÐÇØ °úÁ¤¿¡ ÀÇÇØ deoxyribose sugar¿Í
¿ì¶ó½Ç ¿°±â »çÀÌ¿¡ N-glycosylic bond°¡ ²÷°Ü Å»Çʸ®¹Ìµò ºÎÀ§°¡ »ý¼ºµÈ´Ù. ÀÌ¾î¼ 95¡É¿¡¼ 2ºÐ°£ ¿Ã³¸®¸¦ Çϸé, UNG¸¦ ½ÇȰ½Ã۸é¼, µ¿½Ã¿¡ È¥ÀÔµÈ DNA´ÜÆíÀº
Å»¿°±â ºÎÀ§¿¡¼ phosphate backboneÀÌ °¡¼öºÐÇØµÇ¾î Àý´Ü, ºÐÇØµÈ´Ù.
³»¿ë
TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit(Code 6088)
(200ȸ PCR 50 ¥ìl ¹ÝÀÀ½Ã)
1. UNG(2 U/¥ìl) |
100 ¥ìl |
2. dU plus dNTP Mixture(12.5¡¿)*(Code 4035) |
800 ¥ìl |
3. MgCl2(25 mM) |
1 ml |
* dU plus dNTP MixtureÀÇ Á¶¼º£º
dUTP 7.5 mM
dATP 2.5 mM
dGTP 2.5 mM
dCTP 2.5 mM
º¸Á¸
- 20¡É
º» Á¦Ç° À̿ܿ¡ ÇÊ¿äÇÑ ½Ã¾à, ±â±â(ÁÖµÈ °Í)
* PCR¿ë È¿¼Ò
TaKaRa Taq Hot Start Version(Code R007A/B), TaKaRa Taq(Code R001A/B)µîÀÇ Pol IÇü PCR È¿¼Ò
[ÁÖ] ¥áÇüÅ ȿ¼Ò(ex. °·ÂÇÑ proof reading ±â´ÉÀ» °¡Áö°í ÀÖ´Â È¿¼Ò)´Â ¿ì¶ó½ÇÀ» Æ÷ÇÔÇÑ ÁÖÇü¿¡ °áÇÕÇØ PCR ÀúÇØ¸¦ ÀÏÀ¸Å°´Â °æ¿ì°¡ ÀÖÀ¸¹Ç·Î,
¥áÇüÅ PCR È¿¼Ò ¹× ¥áÇüÅ PCR È¿¼Ò¸¦ ÇÔÀ¯ÇÏ´Â Á¦Ç°Àº º» Á¦Ç°°ú Á¶ÇÕÇØ »ç¿ëÇÏ´Â °ÍÀº ÃßõÇÏÁö ¾Ê´Â´Ù.
* Micropipette, tip
* Thermal Cycler PCR System
Component º°µµ ÆÇ¸Å
Uracil DNA Glycosylase (UNG), heat-labile (Code 2820)
dU plus dNTP Mixture (12.5x) (Code 4035)