제품 설명
TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit은 PCR의 기질로 dTTP 대신에 dUTP를 사용한 후, 우라실(uracil)을 포함하고 있는 DNA를 분해하는 효소인 UNG(Uracil-N-glycosylase)를
이용하여, 앞서 진행된 PCR 증폭 산물의 carryover에 의한 가짜 양성반응을 방지하기 위한 제품이다. PCR전에 UNG를 반응시키면, 우라실을 포함한 PCR 산물이 혼입되어도
UNG에 의해 분해되지만, 주형 DNA는 분해되지 않기 때문에, carryover의 영향을 받지 않고 PCR 증폭을 실시할 수 있다.
UNG는 우라실을 포함하고 있는 single strand DNA와 double strand DNA는 가수분해 하지만, RNA에는 작용하지 않는다. 본 제품에는 UNG와 함께 dUTP를 포함한 dNTP Mixture와
MgCl2 용액이 포함되어 있다. TaKaRa Taq Hot Start Version(Code R007A/B)등의 Pol I형 PCR 효소와 조합해 사용한다.
UNG에 의한 분해
PCR 반응전에 25℃, 10 분간 incubation하면, PCR 반응액에 혼입되어 있는 우라실을 포함한 PCR 산물에는 UNG에 의한 가수분해 과정에 의해 deoxyribose sugar와
우라실 염기 사이에 N-glycosylic bond가 끊겨 탈필리미딘 부위가 생성된다. 이어서 95℃에서 2분간 열처리를 하면, UNG를 실활시키면서, 동시에 혼입된 DNA단편은
탈염기 부위에서 phosphate backbone이 가수분해되어 절단, 분해된다.
내용
TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit(Code 6088)
(200회 PCR 50 μl 반응시)
| 1. UNG(2 U/μl) |
100 μl |
| 2. dU plus dNTP Mixture(12.5×)*(Code 4035) |
800 μl |
| 3. MgCl2(25 mM) |
1 ml |
* dU plus dNTP Mixture의 조성：
dUTP 7.5 mM
dATP 2.5 mM
dGTP 2.5 mM
dCTP 2.5 mM
보존
- 20℃
본 제품 이외에 필요한 시약, 기기(주된 것)
* PCR용 효소
TaKaRa Taq Hot Start Version(Code R007A/B), TaKaRa Taq(Code R001A/B)등의 Pol I형 PCR 효소
[주] α형태 효소(ex. 강력한 proof reading 기능을 가지고 있는 효소)는 우라실을 포함한 주형에 결합해 PCR 저해를 일으키는 경우가 있으므로,
α형태 PCR 효소 및 α형태 PCR 효소를 함유하는 제품은 본 제품과 조합해 사용하는 것은 추천하지 않는다.
* Micropipette, tip
* Thermal Cycler PCR System
Component 별도 판매
Uracil DNA Glycosylase (UNG), heat-labile (Code 2820)
dU plus dNTP Mixture (12.5x) (Code 4035)
