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Home > 전제품보기 > 단백질 발현 · 정제 > His-tag 융합 단백질 정제 > [개요] 차세대 단백질 정제, Capturem™
차세대 His-tag purification system

[개요] 차세대 단백질 정제, Capturem™

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차세대 His-tag purification system
Capturem™ Technology

 

  • Overview
재조합 단백질 생산은 연구단계부터 바이오의약품, 또는 농업 분야에 이르기까지 다양한 연구 분야에서 중요한 과정이다. Tagged protein을 합성 및 정제하는 방법에 따라 실험 결과의 차이를 보일 수 있다. 기존의 Tagged protein 정제 방법은 시간과 노력이 많이 들었던 반면, Clontech의 Capturem™ His-Tagged Purification Kit은 사용이 편리하고, 빠른 시간 내에 고농도의 단백질을 정제할 수 있는 새로운 Capturem™ 기술을 접목한 제품이다.
기존의 immobilized metal affinity chromatography (IAMC) resin column을 이용한 방식은 높은 정제수율 (high capacity)를 보이지만, 단백질 정제 시간이 길고 크기가 큰 분자의 경우 resin bed의 diffusion이 느리다는 단점이 있었다.

Capturem™ 기술은 novel nylon-based membrane과 결합한 새로운 단백질 정제 방법으로, 기존 IMAC resin 방식의 단점을 극복하고 실온에서 빠른 시간 내에 고순도, High-throughput 정제를 가능케 한다. Spin column에 결합되어있는 novel nylon-based membrane은 더욱 높은 protein binding capacity를 가질 수 있도록 변형되어있다. His-Tagged protein 정제를 위한 Capturem™ 제품은 800ul까지의 cell lysate를 수용할 수 있는 Mini-scale의 Miniprep과 25ml까지의 cell lysate를 수용할 수 있는 Maxi-scale의 Maxiprep을 이용 가능하다 (표 1).

표 1. Capturem™ His-Tagged Purification Miniprep, Maxiprep Kits 비교

 

Miniprep Kit

Maxiprep Kit

수율

~100 µg/column

~2.5 mg/column

샘플적용량

up to 800 µl

up to 25 ml

정제시간

5 min

15 min

정제 단백질 농도

~0.3–1 mg/ml

up to 4.5 mg/ml



Modified membrane pores

표 2. Capturem™ His-Tagged Protein Purification Kit 특징

특징

장점

실온에서 5분~15분 프로토콜

Cold room 대신 실온에서 단백질 정제 시간 단축

Wash buffer양에 대해 높은 비율의 bed volume (1:300)

고순도의 eluate 획득 가능: bed volume이 적어 오염물질이 거의 혼입되지 않은 고순도의 단백질 정제 가능

Small bed volume

More concentrated protein (~0.3 to 4.5 mg/ml)

Mammalian과 bacterial cell lysate 적용 가능

다양한 실험에 쉽게 적용 가능

Short residence time
(빠른 반응시간)

시간 절약과 함께 단백질 분해나 실활 (loss of activation)을 방지

Native, denature 조건에서도 높은 효율

다양한 조건의 샘플 및 실험에도 융통성있게 적용 가능

다양한 Lysis buffer 대응

Choice of cell lysis system