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Home > 전제품보기 > Genome Editing > Overivew > [선택가이드] CRISPR Knock-in Editing

[선택가이드] CRISPR Knock-in Editing

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[선택가이드] CRISPR Knock-in Gene Editing



CRISPR Knock-in Gene Editing
Cas9 nuclease에 의해 절단된 목적유전자는 세포의 DNA 복구시스템 (DNA repair system)인 NHEJ (Non-homologous end joining) pathway 또는 HDR (Homology directed repair) pathway에 의해 double strand DNA 상태로 회복된다. NHEJ pathway 이용 시, 무작위적인 Indel (Insertion and deletion) 생성으로 인한 frame shift 현상으로 Knock-out을 진행할 수 있다. 반면, HDR donor template 존재 하에서는 HDR pathway가 유발되어 원하는 유전자를 삽입 (insertion)하는 Knock-in 실험 또는 원하는 서열의 대체 (replacement), 결실 (deletion)의 결과를 얻을 수 있다.




CRISPR Knock-in Gene Editing 실험 세팅 가이드
CRISPR Knock-in 실험, 어려워 하지마세요!
다카라코리아가 성공적인 Knock-in Gene Editing 실험 세팅을 위해 추천드립니다.
아래와 같이 실험 세팅하면 That’s Good Science!

성공적인 Knock-in 실험의 핵심 RNP (Ribonucleoprotein) delivery




고수율 sgRNA 합성과 스크리닝
Guide-it™ Complete sgRNA Screening System (Code 632636)
  • sgRNA의 합성 (in vitro transcription)
  • 간편한 프로토콜로 고품질, 고수율의 sgRNA 제작 (12 ㎍ 이상)
  • 합성한 sgRNA는 delivery (transfection, electroporation) 단계에 바로 이용
  • 실제 세포 실험 전에 sgRNA의 유효성 및 효율 확인 (sgRNA screening)

Code
제품명
용량
특징
632636 Guide-it™ Complete sgRNA Screening System 50 회 sgRNA 합성과 스크리닝을 위한 All-in-one
632635 Guide-it™ sgRNA In Vitro Transcription Kit 50 회 sgRNA in vitro 합성
632639 Guide-it™ sgRNA Screening Kit 50 회 전기영동으로 간단히 sgRNA 효율 스크리닝
632638 Guide-it™ IVT RNA Clean-Up Kit 50 회 합성한 sgRNA를 고순도로 정제

효율 높은 CRISPR Knock-in을 위한 HDR Donor Template 합성
Guide-it™ Long ssDNA Production System (Code 632644)
  • 500 bp ~ 5 kb 까지의 single strand DNA (ssDNA) HDR Donor Template 합성
  • Cloning과 gel selection 정제 과정이 없는 빠르고 쉬운 3 step 프로토콜
  • Single strand DNA (ssDNA) HDR Donor Template의 장점?
    - Random integrationㆍexpression이 낮아 Konck-in editing 효율을 더욱 향상
    - dsDNA donor template에 비하여 훨씬 낮은 세포독성

Code
제품명
용량
특징
632644 Guide-it™ Long ssDNA Production System 25 회 Long ssDNA HDR template 합성 (정제 Kit 포함)
632645 Guide-it™ Long ssDNA Strandase Kit 25 회 Long ssDNA HDR template 합성



High efficiency with Low cell toxicity
Guide-it™ Recombinant Cas9 (Electroporation-Ready) (Code 632641)
  • Electroporation에 바로 사용 가능한 고순도의 Cas9 단백질 (spCas9)
  • 저농도의 Glycerol을 함유하여 세포 독성은 낮추고 유전자 편집효율은 더 높게
  • RNP (Ribonucleoprotein) 유전자 도입의 핵심 - off-target effect 최소화의 비결

Code
제품명
용량
특징
632641 Guide-it™ Recombinant Cas9 (Electroporation-Ready)
100 ㎍
Glycerol 함량이 현저히 낮은 고순도,
고수율의 Cas9 단백질
632640 Guide-it™ Recombinant Cas9 (Electroporation-Ready)
3x100 ㎍
*고농도 (10 ㎍/㎕)의 Guide-it™ Recombinant Cas9 (Electroporation-Ready) (Custom-order), (고객지원센터 별도문의, Tel. 02-2081-2510)

Guide-it™ Complete sgRNA Screening System (Code 632636)으로 제작한 sgRNA
Guide-it™ Long ssDNA Production System (Code 632644)로 제작한 HDR Donor Template와 co-electroporation하면,
▶ Off-target effect는 낮고↓ , 유전자 편집 효율은 높은↑ , Knock-in Gene editing 성공!



약 4시간만에 간단하고 정밀하게 Knock-in editing 검출
Guide-it™ Knockin Screening Kit (Code 632659)
  • Knock-in으로 생성된 단일염기치환 (SNP) 또는 삽입 (insertion) 변이를 정확하고 민감하게 검출
  • 게놈의 위치 (Genomic locus), edit 종류에 관계없이 적용
  • Heterogenous population 또는 clonal cell population에서 Knock-in 검출
  • Heterozygous clone으로부터 두 종류의 allele (SNP and WT)을 동시에 검출 가능
  • 단 4시간만에 실험이 가능한 간단하고 빠른 워크 플로우

Code
제품명
용량
특징
632659 Guide-it™ Knockin Screening Kit 100 회
단 4시간이면 Knock-in 효율 확인
632660 Guide-it™ Knockin Screening Kit 400 회


Choose an HDR
template format


<온라인 세미나>
Knock-in 실험을 위한
HDR Template의 형태



Homology-directed
repair FAQs


<FAQ (국문)>
HDR Knock-in 실험에
대해 자주 묻는 질문
Mouse CRISPR
knockin protocol


<Customer’s data>
Mouse embryo의
Knock-in 유전자 편집을
위한 프로토콜
Site-specific gene
knockins using long
ssDNA


<Technical Note>
Guide-it Long ssDNA
Production System을
이용하여 제작한 long
ssDNA의 Knock-in
CRISPR/Cas9-
mediated knockins in
iPS cells


<Technical Note>
Guide-it Long ssDNA
Production System으로 제작한
long ssDNA HDR
template를 이용하여 iPSC
Knock-in editing


CRISPR takes a giant
Step towards the
clinic


<Technical Note>
T-cell reprogramming을
위한 새로운 접근 방법
Electroporationgrade
Cas9 for
editing
in diverse cell types


<Technical Note>
Guide-it Cas9 protein의
높은 유전자 편집효율 -
iPSC, hematopoietic
stem cells


Screening for
effective guide RNAs


<Technical Note>
목적세포의 유전자 편집
실시 이전에, sgRNA의
유전자편집 효율을 미리
테스트
Tag an endogenous
gene with AnGFP1 in
iPS cells


<Technical Note>
Reporter line 제작을
위해 endogenous gene을
tagging하는 방법
Tag an endogenous
gene with a myc tag
in iPS cells


<Technical Note>
Epitope tag을 이용하여
endogenous gene을
tagging하는 방법
Efficient SNP
engineering


<Technical Note>
Bulk-edited cell과 clonal
cell population에서
Knock-in을 검출하는
빠르고 간단한 방법
Efficient SNP
engineering


<Published>
Guide-it™ 제품을 이용해,
RNP방식으로 고효율의
single-base substitutions
도입