• CRISPR/Cas9 genome editing을 위한 sgRNA의 합성 (in vitro transcription)
• 간편한 프로토콜로 고품질, 고수율 (12ug 이상)의 sgRNA 제작 가능
• 합성한 sgRNA는 추후 delivery (transfection, electroporation)에 이용 가능
• Screening Kit에 포함되어있는 Cas9 단백질과 조합하여, 실제 세포 실험 전에 sgRNA의 유효성 및 효율 확인 가능 (sgRNA screening)

제품설명

기존 제품과의 차이점

본 제품은 기존 제품과 제품명은 같지만, 버전 업그레이드 출시되었으며 아래와 같이 변경되었다.

Guide-it™ sgRNA In Vitro Transcription Kit

• 용량: 10회 → 50회로 변경
• 프로모터 및 scaffold 서열 변형으로 sgRNA 합성 수율 3배 이상 향상(12ug 이상) 및 genome editing 효율 향상
• Forward primer 서열 변경: T7 promoter와 scaffold 서열 변형으로 Primer 총 길이가 69nt → 56-58nt로 변경

[기존]- total length 69nt


[신규]- total length 56-58nt

• Template DNA(sgRNA encoding template)의 PCR 증폭을 위하여 PrimeSTAR® Max DNA Polymerase를 적용하여 비특이적 증폭 감소, Agarose gel purification 방법 불필요
• Phenol/Chloroform 정제 대신 스핀 컬럼 방식의 RNA Clean-Up Kit으로 RNA 정제

Guide-it™ sgRNA Screening Kit

• 용량: 30회 → 50회로 변경
• Target DNA(DNA cleavage template)의 조제에 Terra PCR Mix을 이용하여 Direct PCR 가능

상세내용 및 데이터

그림 1. Flow chart describing how the Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (including the Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit) and Guide-it sgRNA Screening Kit work together in the Guide-it Complete sgRNA Screening System, which can be used to synthesize and test the efficacy of sgRNAs.


그림 2. Schematic highlighting the key steps for using Guide-it kits for the production of high amounts of single guide RNA (sgRNA) and screening for cleavage efficacy at the desired target site using recombinant Cas9 protein.


그림 3. RNA quality produced via in vitro transcription. sgRNAs produced using the Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit were compared with sgRNAs produced using a competitor’s kit. The Guide-it kit produced a high-quality, single band for each reaction, while the competitor’s kit showed unwanted byproducts.


그림 4. sgRNA yield and quality for different gene targets using the Guide-it Complete sgRNA Screening System. Panel A. 20 μl of each sgRNA in vitro transcription (IVT) reaction was incubated for 4 hr at 37°C. The yield for each transcribed sgRNA was quantified using a NanoDrop spectrophotometer. Panel B. Each sgRNA IVT reaction was a run on an Agilent Bioanalyzer to assay for sample quality.

보존

구성품 (자세한 내용은 CoA를 참조하세요)