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Nested PCR로 Mycoplasma 정밀검출

TaKaRa PCR Mycoplasma Detection Set

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
6601
TaKaRa PCR Mycoplasma Detection Set
관련학술 구매하기
100 회
330,000원  6601_e.v1808Da.pdf

제품설명
TaKaRa PCR Mycoplasma Detection Set는 배양세포 등의 생물 재료에 감염되는 mycoplasma를 PCR법을 이용하여 검출하는 primer set이다. 본 제품을 사용하면 기존 배양법으로 1주일 가량 소요되는 mycoplasma 검출을 PCR 증폭 후 전기영동 밴드 검출로 수시간 안에 간편하게 판정할 수 있다.
본 제품은 배양세포에서 자주 발견되는 것뿐만 아니라 Mycoplasma 속 중의 11종 (M. fermentans, M. hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. salivarium, M. hominis, M. pulmonis, M. arthritidis, M. neurolyticum, M. hyopneumoniae, M. capricolum)과 Ureaplasma속 중의 1종 (U. urealyticum)도 높은 감도로 검출할 수 있다.
본 제품에는 DNA polymerase, dNTP는 포함되어 있지 않고, TaKaRa Taq™(Code R001A/B) 또는 TaKaRa Ex Taq®(Code RR001A/B)과 함께 사용하는 것을 추천한다.

[PCR법에 의한 Mycoplasma 검출 원리]
Mycoplasma를 포함한 원핵생물 사이에서 rRNA 염기서열은 매우 잘 보존되어 있다. 반면 rRNA operon 상에서 rRNA를 coding하는 DNA의 spacer 영역, 예를 들면 16S와 23S 사이의 영역은 길이 및 서열이 생물종에 따라 크게 다르다. 이러한 spacer 영역은 mycoplasam의 각 종간에도 상당히 다른 부분이 있고, 잘 보존되어 있는 서열도 존재한다. 본 제품은 이러한 spacer 영역을 16S와 23S의 rRNA를 coding 하는 DNA상의 2개 primer F1과 R1을 이용하여 PCR 증폭한 뒤, 보존서열을 바탕으로 디자인 된 primer (그림1의 F2)와 23S DNA 상의 primer R2로 Nested PCR을 진행한다. 이를 통해 PCR 반응액에 혼입되는 배양 세포 등의 다른 생물종 유래의 DNA에 영향을 받지 않고 mycoplasma DNA만 특이적으로 증폭할 수 있어 mycoplasma의 검출 감도 뿐만 아니라 검출 특이성도 높일 수 있다. 표1은 본 제품 안에 포함된 4개의 primer 서열과 이에 대응하는 12종의 mycoplasma의 16S-Spacer-23S 영역의 서열을 나타낸다.

그림 1. PCR법에 의한 Mycoplasma의 검출원리

표1. Primer 서열과 그에 대응하는 mycoplasma DNA 서열 (o는 primer 서열과 같음을 나타냄)

내용 (50 ㎕ 반응 계, 100회)

1. MCGp F1 Primer (20 pmol/㎕)

50 ㎕

2. MCGp R1 Primer (20 pmol/㎕)

50 ㎕

3. MCGp F2 Primer (20 pmol/㎕)

50 ㎕

4. MCGp R2 Primer (20 pmol/㎕)

50 ㎕

5. Control Template (1 ng/㎕)

50 ㎕

보존 -20℃
Control Template에 대해
샘플 또는 세포배양 배지에 PCR 저해물질이 포함되어 있는지 확인하기 위해 Control Template을 사용하여 positive control test를 진행해야 한다.
샘플 (또는 배지)에 Control Temple을 더하여 샘플과 같이 DNA를 추출하고 이를 주형으로 control test를 진행하며, Control Template을 이용한 경우에는 F1과 R1 primer로 810 bp, F2와 R2 primer로 590 bp의 DNA단편이 증폭된다.






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