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Poly(A) 및 반복 서열을 포함하는 유전자의 클로닝에 최적

Takara Stable Competent Cells

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	9132	Takara Stable Competent Cells	1 Set (100 ㎕×10)	273,000원

Product index

제품설명

본 제품은 DNA 안정성이 향상되도록 homologous recombination과 관련된 유전자의 일부가 결손되어 있어 poly(A) 서열이나 반복 서열을 가진 불안정한 DNA를 클로닝할 때 적합하다. 따라서 Takara IVTpro™ 시리즈(Code 6141 외) 등의 IVT 실험에 매우 효과적으로 사용할 수 있다. 또한, 이 제품은 T1 bacteriophage 감염에 필요한 fhuA 유전자가 결손되어 있어 해당 phage에 내성이 있다.

클로닝 시, In-Fusion^® Snap Assembly Master Mix (Code 638947 외)의 사용을 권장하며, pUC계 벡터로 형질전환하면 blue/white colony screening이 가능하다.

ploy(A) 안정성, 반복 서열의 안정성 비교

Competent Cells

Poly(A) length [bp]

Poly(A) full length ratio

E. coli JM109
Competent Cells

105	105	43	66	105	44	105	22	27	105	105	105
105	105	105	105	105	105	105	32	105	105	105	105
105	105	105	105	105	105	105	48	105	105	105	105
105	105	105	105	105	105	105	105	46	105	45	105

81.25％
(39/48)

Takara Stable
Competent Cells

105	105	105	65	105	105	105	105	105	105	105	105
105	105	105	105	105	105	105	105	105	105	105	105
105	105	22	105	105	105	105	105	105	105	105	105
105	105	105	105	105	105	66	105	105	105	105	105

93.75％
(45/48)

그림 1. Poly(A) 안정성의 비교

105 bp의 poly(A)를 코딩하는 플라스미드 DNA를 E.coli JM109 Competent Cells (Code 9052)와 본 제품(Code 9132)에 형질전환하고 LB 플레이트에서 배양한 후, 48개의 콜로니에서 플라스미드를 정제하였다. 정제한 플라스미드를 시퀀싱하여 (sanger법) poly(A)의 길이를 측정하였다. Poly(A) 탈락으로 인해 105 bp보다 길이가 짧아진 poly(A)는 빨간색으로 표시하였다.
48개 플라스미드 중 poly(A) 전체 길이를 갖는 플라스미드가 JM109에서는 39개 (poly(A) full length 비율 : 39/48=81.25%), Takara Stable Competent Cells에서는 45개 (poly(A) full length 비율 : 45/48=93.75%)이었다. 이 결과는 Takara Stable Competent Cells이 JM109보다 poly(A)를 포함하는 유전자 클로닝에 안정적이라는 것을 보여준다.

그림 2. 반복 서열의 안정성 비교
제한효소 처리로 절단 및 추출할 수 있는 32 bp × 15회와 32 bp × 20회 반복 서열을 코딩하는 플라스미드 DNA (왼쪽 그림) 를 E.coli JM109 Competent Cells (Code 9052)와 본 제품(Code 9132)으로 형질 전환하여 LB 플레이트에 배양 후 얻은 콜로니에서 플라스미드를 정제하였다.
플라스미드의 길이와 제한효소 (Sal I, EcoR V, EcoR I) 처리 시 검출되는 밴드를 아가로스겔 전기영동으로 확인한 결과, 정상적인 서열을 유지하고 있는 플라스미드가 JM109는 96개 cell 중 64개 (66.7%)인 반면, Takara Stable Competent Cells은 120개 중 97개 (80.8%) 였다. 이 결과는 Takara Stable Competent Cells가 JM109보다 반복 서열을 가진 유전자에 대해 안정성이 높다는 것을 보여준다.

구성

Takara Stable Competent Cells	100 ㎕ x 10 vials
pUC19 DNA (0.1 ng/㎕)	10 ㎕
SOC Medium*	1 ㎖ x 10 vials

* SOC Medium의 구성

2 %	Tryptone
0.5 %	Yeast extract
10 mM	NaCl
2.5 mM	KCl
10 mM	MgSO₄
10 mM	MgCl₂
20 mM	Glucose

보관

- 80℃

Genotype

F ^- , endA1 , supE44 , thi-1 , recA1 , relA1 , gyrA96 , phoA , ΔsbcCD , Φ80d lacZΔM15 , ΔfhuA , Δ(lacZYA - argF) U169 , Δ(mrr - hsdRMS - mcrBC) , ΔmcrA , λ ^-
( K- 12 strains of E. coli)

Cell density

1～2×10⁹ bacteria/㎖

플라스미드 스크리닝에 사용된 항생제 및 selection 농도

항생제	Ampicillin	Kanamycin	Chloramphenicol	streptomycin	tetracycline
농도 (㎍/㎖)	100	50	20	50	20

관련 제품

- Template plasmid 제작부터 고수율 IVT까지 Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System (Code 6141)
- IVT용 template plasmid 제작 kit : Cloning Kit for mRNA Template (Code 6143)
- IVT 전 vector의 선형화에 사용하는 Type IIS 제한효소: BspQ I (Code 1227A)
- In-Fusion^® cloning시 개선된 colony 형성 능력으로 성능은 up 가격은 down In-Fusion^® Snap Assembly Master Mix (Code 638947)
- Cloning을 위한 PCR 효소 : PrimeSTAR^® GXL DNA Polymerase (Code R050A)
- pUC계 plasmid vector DNA 클로닝 시 스크리닝 : X-Gal (5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β- D -Galactoside (Code 9031)

Keyword :

Competent Cells & Electro-Cells

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