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저농도 DTT에서도 안정적인 RNase inhibitor

Recombinant RNase Inhibitor ver.2.0

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	2315A	Recombinant RNase Inhibitor ver.2.0	5,000 U	131,000원
Takara	2315B	Recombinant RNase Inhibitor ver.2.0	25,000 U (2315A x 5)	595,000원

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돼지 간 유래의 recombinant RNase inhibitor
재조합 단백질의 Cys 잔기에 변이를 도입하여 산화 반응에 대한 저항성 강화 (저농도 DTT 적용 가능)
RNA 안정성이 요구되는 in vitro transcription 및 RT-PCR 등 다양한 실험에 적용 가능

제품설명

Recombinant RNase Inhibitor ver.2.0은 돼지 간 유래의 Recombinant RNase Inhibitor (Code 2313A)의 업그레이드 제품이다. 이 제품은 인간 태반이나 돼지 간에서 직접 정제한 RNase inhibitor와 매우 비슷한 성질을 유지하면서, 불활성화의 원인이 되기 쉬운 Cys 잔기에 변이를 도입해 산화 반응에 대한 저항성을 올려 단백질의 안정성을 강화하였다 (그림 1).
RNase Inhibitor는 RNaseA와 1:1의 복합체를 형성하여 RNase의 활성을 억제한다. 이러한 반응은 가역적이므로, urea 또는 sulfhydryl 시약으로 복합체를 해리 시킴으로써 RNase의 활성을 되살리고, inhibitor를 비가역적으로 실활 시킬 수 있다. 또한, 기존의 길항성 저해제 (nucleotide류, 무기인산류)와는 달리 단백질이므로 페놀 처리로 반응계에서 간단히 제거할 수 있다. 또한 RNase H의 활성은 저해하지 않는다.
본 제품은 RNA의 안정성이 중요한 in vitro transcription 및 RT-PCR등 다양한 실험에 사용될 수 있다.

그림 1. 산화 반응에 대한 저항성 비교 실험 결과
산화 반응에 대한 저항성이 강화된 Recombinant RNase Inhibitor ver.2.0 (Code 2315A)와 기존 제품인 Recombinant RNase Inhibitor (Code 2313A) 및 타사의 RNase inhibitor, 총 3종의 제품을 과산화수소 H₂0₂농도를 증가시키면서 상층액으로 방출된 핵산의 양 (RNaseA-mediated rRNA 분해 지표)을 측정하였다 (3반복 2회 측정). H₂0₂의 농도가 낮은 경우에는 활성의 차이가 크지 않지만, 0.01% 이상의 경우에는 효소의 활성이 차이를 보이기 시작하였다. 그 결과, 효소의 불활성화의 주요 요인으로 생각되는 Cys 잔기에 변이를 도입한 Recombinant RNase Inhibitor ver.2.0 (Code 2315A)이 가장 강한 산화 반응에 대한 저항성을 가진 것이 확인되었다.

용도

- in vitro transcription/translation (1 U/㎕ reaction)^* - in vitro transcription/translation with cell-free extract (20 U/㎕ reaction)^* - RT-PCR (0.5 U/㎕ reaction)^*- cDNA synthesis (0.5 U/㎕ reaction)^* - Polysome isolation (1 U/㎕ reaction)^* ^*각 반응액에서의 RNase inhibitor 사용 농도 예시

내용

Recombinant RNase Inhibitor ver.2.0 (40 U/㎕)

5,000 U

보존 -20℃

형상

HEPES-KOH, pH7.5	20 mM
KCl	50 mM
DTT	5 mM
Glycerol	50%

기원

E. coli carrying the plasmid containing the gene for ribonuclease inhibitor from porcine liver

일반적인 성질

- 분자량: 약 52 kDa
- 최적 pH: RNase 저해 활성은 다양한 pH에서 보이지만, pH7~8에서 최대 활성을 보인다.

활성의 정의

5 ng의 RNase A 활성을 50% 저해하는 효소량을 1U으로 한다.
(2', 3'-cyclic CMP에서 RNase A에 의해 생성되는 3'-CMP를 정량)

사용상의 주의

- 본 효소의 과도한 vortexing은 피하시기 바랍니다.
- 활성 유지를 위하여 목적하는 실험의 반응을 저해하지 않는 농도의 DTT를 반응액에 첨가하여 실험을 진행한다 (e.g. 1 mM).

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Keyword :

Reverse Transcription (Takara)

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