닫기
TaKaRa
로그인  |   회원가입  |   ID/PW 찾기   |  제품상담문의  
제품명/제품코드
키워드검색
검색
닫기
  • 고객지원 
  • 업무안내│제품문의
  • 전화번호│02-2081-2510
  • Email     │support@takara.co.kr
  • 대전지사 
  • 업무안내│대전/충청지역 주문, 제품문의
  • 전화번호│042-828-6525
  • Email     │tkbd@takara.co.kr
  • 업무시간안내
  • [ 평  일 ] 09 : 00 ~ 18 : 00 │ [ 점심시간 ] 12 : 00 ~ 13 : 00
  • 토·일요일, 공휴일은 휴무입니다.
Home > 전제품보기 > Cloning 관련 > Competent Cells & Electro-Cells > Takara Stable Competent Cells
Poly(A) 및 반복 서열을 포함하는 유전자의 클로닝에 최적

Takara Stable Competent Cells

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
9132
Takara Stable Competent Cells
관련학술 구매하기 LMO제품 
1 Set (100 ㎕×10)
273,000원  9132_ds_j.pdf

제품설명
본 제품은 DNA 안정성이 향상되도록 homologous recombination과 관련된 유전자의 일부가 결손되어 있어 poly(A) 서열이나 반복 서열을 가진 불안정한 DNA를 클로닝할 때 적합하다. 따라서 Takara IVTpro™ 시리즈(Code 6141 외) 등의 IVT 실험에 매우 효과적으로 사용할 수 있다. 또한, 이 제품은 T1 bacteriophage 감염에 필요한 fhuA 유전자가 결손되어 있어 해당 phage에 내성이 있다.

클로닝 시, In-Fusion® Snap Assembly Master Mix (Code 638947 외)의 사용을 권장하며, pUC계 벡터로 형질전환하면 blue/white colony screening이 가능하다.
ploy(A) 안정성, 반복 서열의 안정성 비교
Competent Cells
Poly(A) length [bp]
Poly(A) full length ratio
E. coli JM109
Competent Cells
105
105
43
66
105
44
105
22
27
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
32
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
48
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
46
105
45
105
81.25%
(39/48)
Takara Stable
Competent Cells
105
105
105
65
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
22
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
105
66
105
105
105
105
105
93.75%
(45/48)


그림 1. Poly(A) 안정성의 비교

105 bp의 poly(A)를 코딩하는 플라스미드 DNA를 E.coli JM109 Competent Cells (Code 9052)와 본 제품(Code 9132)에 형질전환하고 LB 플레이트에서 배양한 후, 48개의 콜로니에서 플라스미드를 정제하였다. 정제한 플라스미드를 시퀀싱하여 (sanger법) poly(A)의 길이를 측정하였다. Poly(A) 탈락으로 인해 105 bp보다 길이가 짧아진 poly(A)는 빨간색으로 표시하였다.
48개 플라스미드 중 poly(A) 전체 길이를 갖는 플라스미드가 JM109에서는 39개 (poly(A) full length 비율 : 39/48=81.25%), Takara Stable Competent Cells에서는 45개 (poly(A) full length 비율 : 45/48=93.75%)이었다. 이 결과는 Takara Stable Competent Cells이 JM109보다 poly(A)를 포함하는 유전자 클로닝에 안정적이라는 것을 보여준다.


그림 2. 반복 서열의 안정성 비교
제한효소 처리로 절단 및 추출할 수 있는 32 bp × 15회와 32 bp × 20회 반복 서열을 코딩하는 플라스미드 DNA (왼쪽 그림) 를 E.coli JM109 Competent Cells (Code 9052)와 본 제품(Code 9132)으로 형질 전환하여 LB 플레이트에 배양 후 얻은 콜로니에서 플라스미드를 정제하였다.
플라스미드의 길이와 제한효소 (Sal I, EcoR V, EcoR I) 처리 시 검출되는 밴드를 아가로스겔 전기영동으로 확인한 결과, 정상적인 서열을 유지하고 있는 플라스미드가 JM109는 96개 cell 중 64개 (66.7%)인 반면, Takara Stable Competent Cells은 120개 중 97개 (80.8%) 였다. 이 결과는 Takara Stable Competent Cells가 JM109보다 반복 서열을 가진 유전자에 대해 안정성이 높다는 것을 보여준다.
구성

Takara Stable Competent Cells

100 ㎕ x 10 vials

pUC19 DNA (0.1 ng/㎕)

10 ㎕

SOC Medium*

1 ㎖ x 10 vials

* SOC Medium의 구성
2 %

Tryptone

0.5 %

Yeast extract

10 mM

NaCl

2.5 mM

KCl

10 mM

MgSO4

10 mM

MgCl2

20 mM

Glucose

보관
- 80℃
Genotype
- , endA1 , supE44 , thi-1 , recA1 , relA1 , gyrA96 , phoA , ΔsbcCD , Φ80d lacZΔM15 , ΔfhuA , Δ(lacZYA - argF) U169 , Δ(mrr - hsdRMS - mcrBC) , ΔmcrA , λ -
( K- 12 strains of E. coli)
Cell density
1~2×109 bacteria/㎖
플라스미드 스크리닝에 사용된 항생제 및 selection 농도

항생제

Ampicillin

Kanamycin

Chloramphenicol

streptomycin

tetracycline

농도 (㎍/㎖)

100

50

20

50

20

관련 제품
- Template plasmid 제작부터 고수율 IVT까지 Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System (Code 6141)
- IVT용 template plasmid 제작 kit : Cloning Kit for mRNA Template (Code 6143)
- IVT 전 vector의 선형화에 사용하는 Type IIS 제한효소: BspQ I (Code 1227A)
- In-Fusion® cloning시 개선된 colony 형성 능력으로 성능은 up 가격은 down In-Fusion® Snap Assembly Master Mix (Code 638947)
- Cloning을 위한 PCR 효소 : PrimeSTAR® GXL DNA Polymerase (Code R050A)
- pUC계 plasmid vector DNA 클로닝 시 스크리닝 : X-Gal (5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β- D -Galactoside (Code 9031)

Keyword :

Competent Cells & Electro-Cells
>
식물 형질전환을 위한 유전자 도입에
Agrobacterium tumefaciens LBA4404 Electro-Cells
>
Chaperone team을 발현하는 대장균 BL21 균주의..
Chaperone Competent Cell BL21 시리즈
>
In-Fusion® 시스템에 최적인 comp. Cells
E. coli Competent Cells (Clontech 제품)
>
Long strand DNA도 methylated DNA도 OK!고효..
E. coli Competent Cells (Takara Bio 제품)
>
Poly(A) 및 반복 서열을 포함하는 유전자의 클..
Takara Stable Competent Cells