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※이 제품은 일반 연구용 시약 (RUO grade) 외에도 치료제 및 백신의 제조 공정 프로세스 개발을 목적으로 한 High Quality (HQ) grade 시약이 판매되고 있습니다.
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제품설명
T7 RNA Polymerase ver.2.0은 기존 T7 RNA Polymerase의 반응성을 높인 업그레이드 제품이다.
본 효소는 T7 promoter 서열 (5'-TAATACGACTCACTATA-3')을 포함한 dsDNA를 template으로, NTP를 기질로 사용하여 promoter 하류 서열을 전사하여 단일 가닥의 RNA를 합성한다.
업그레이드된 반응성으로 높은 processivity와 transcription frequency를 가지기에 고품질, 고수율의 RNA의 transcription이 가능하다.
※대표적인 T7 promoter 서열과 transcription start sequence
IVT 반응을 위한 template DNA를 제작할 때 대표적으로 사용하는 T7 promoter 서열은 아래와 같다. 여기서 transcription start sequence (+1 position)의 염기를 “G”로 하는 것이 효율적인 RNA 합성을 위해서 매우 중요하다. 다만, RNA 서열과 5’-capping에 사용하는 Cap analog의 특징에 따라 template을 디자인할 필요가 있다.
용도
- Cap analog를 이용한 capped mRNA 합성
- Long non-coding RNA 합성
- Guide RNA 합성
- siRNA 전구체 합성
- RT-qPCR용 RNA standard template 합성
- Hybridization을 위한 RNA probe 합성
내용
T7 RNA Polymerase ver.2.0 (200 U/㎕) |
20,000 U |
10× T7 RNA Polymerase Buffer |
1 ㎖ |
보존 -20℃
농도 200 U/㎕
기원
Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for phage T7 RNA polymerase
일반적인 성질
- 질량: 약 99 kDa
- 보조인자: Mg2+
활성의 정의
1시간 동안 37℃에서 1 nmol의 [3H]GMP가 산 불용성의 분획으로 도입되는 효소의 양을 1U로 한다.
활성 측정용 반응제 조성
40 mM |
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Tris-HCl (pH8.0) |
8 mM |
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MgCl2 |
2 mM |
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Spermidine |
5 mM |
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DTT |
0.4 mM |
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ATP, UTP, CTP |
0.4 mM |
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[3H]GTP |
1 ㎍/ 50 ㎕ |
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pT7-2 DNA |
* 반응예시 : 약 1.9 kb의 RNA합성시
효율적인 합성을 위하여 Pyrophosphatase (inorganic) (IPP) (Code 2450A)를 반응액에 추가한다.
또한, 산화저항성이 있는 RNase inhibitor (Code 2315A)를 첨가하면 반응의 안정성을 높일 수 있다.
Sterile purified water |
X μl |
10X T7 RNA Polymerase Buffer |
2 μl |
ATP, CTP, GTP, UTP |
each 10 mM |
Template DNA |
0.5 - 2 μg |
Recombinant RNase Inhibitor, ver.2.0 or (HQ) |
20 U |
Pyrophosphatase (inorganic) or (HQ) |
0.1U |
T7 RNA Polymerase ver.2.0 or (HQ) |
200 U |
Total |
20 μl |
Incubate at 37℃ for 1 - 2 hrs. |
주의사항
- 본 효소는 과도한 vortexing을 피하시기 바랍니다.
- Template DNA나 반응에 사용되는 tube, micro-pipette 등이 RNase에 오염되어 있는 경우 RNA의 합성 수율이 저하되거나 fragmentation이 일어날 수 있습니다. 따라서 RNase free 전용 tube 및 micro-pipette을 사용하고 일회용 장갑을 사용하여 RNase 오염에 주의 바랍니다.
- 균일한 길이의 RNA를 합성하기 위해서, T7 promoter를 포함한 선형화 된 plasmid 혹은 PCR 산물 등이 template DNA로 사용할 수 있습니다. 선형화한 template은 5’ 돌출말단 혹은 blunt-end를 가지는 것이 효율적입니다.
- 10×T7 RNA Polymerase Buffer에는 spermidine이 포함되어 있습니다. Spermidine은 핵산과 복합체를 형성하여 불용성 물질로 침전되는 경우가 있어, template DNA는 반드시 효소를 제외한 component 중 마지막 순서로 첨가해야 합니다.
- 본 제품에는 NTP (ATP, CTP, GTP, UTP)가 포함되어 있지 않습니다. Ribonucleoside 5＇-Triphosphates (Code 4041 외)를 준비해 주세요.
관련제품
- RNA 백신 연구를 위한 Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System (Code 6141)
- RNA, DNA 합성 시 PPi를 제거하여 수율을 높이는 Pyrophosphatase (inorganic) (Code 2450A)
- NTP 4종 (ATP, CTP, GTP, UTP) Ribonucleoside 5＇-Triphosphates (Code 4041 외)
- mRNA 전용 transfection 시약 TransIT®-mRNA Transfection Kit (Code MIR 2250)
