TaKaRa
로그인  |   회원가입  |   ID/PW 찾기  
제품명/제품코드
키워드검색
검색
Home > 전제품보기 > 단백질 발현 · 정제 > Brevibacillus/Bacillus 발현계 > B. subtilis Secretory Protein Expression System
효과적인 분비발현계의 구축 및 Screening

B. subtilis Secretory Protein Expression System

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
3380
B. subtilis Secretory Protein Expression System
관련학술 관심상품등록 구매하기
10 회
907,000원  3380_e.v1801Da.pdf


*본 제품군을 상업적 용도로 구매하는 경우 다카라코리아 (02-2081-2510)로 별도 문의바랍니다.
내용 (library 제작 10분)
SP DNA mixture (0.032 pmol/㎕) *1 45 ㎕
pBE-S DNA (0.5 μg/㎕) *2 20 ㎕
B. subtilis RIK1285 (glycerol stock) *3 100 ㎕×2
*1 In - Fusion cloning의 173 가지 B. subtilis 분비 시그널 펩티드(signal peptide) DNA
*2 형상 : TE buffer (pH8.0)
*3 Marburg 168 derivative: trpC2, lys1, aprE Δ3, nprR2, nprE18
보존
- 80 ℃
(SP DNA mixture 및 pBE-S DNA는 -20℃에서도 보존 가능하다.)
제품설명
Bacillus subtilis를 숙주로 하는 재조합 단백질의 생산은 가용화 발현 및 분비 발현에 뛰어나다. 특히 S-S결합과 같은 복잡한 구조를 가지는 단백질에 효과적이다. 또한, 대장균을 숙주로 하는 발현계와는 달리 엔도톡신 (endotoxin)이 생산 단백질 중에 혼입하지 않는다. 이러한 장점이 있는 반면에, 이종 단백질의 분비 효율은 시그널 펩티드 타입에 크게 영향을 준다는 것이 T. Eggert 그룹에 의해 보고되고 있다. 다카라는 B. subtilis의 효율적인 분비 발현계의 구축과 스크리닝을 위한 시스템을 개발하였다. 본 시스템에서는 B. subtilis유래의 173종류의 분비 시그널 펩티드에서 목적 단백질의 분비 발현에 적합한 시그널 펩티드를 스크리닝 하는 것이 가능하다. 또한, B. subtilis 플라스미드는 복제수가 대단히 적기때문에 B. subtilis에서의 플라스미드 구축이 곤란하다는 문제가 있지만, 본 시스템의 pBE-S DNA는 E. coli와 B. subtilis의 셔틀 벡터이며 대장균에서 발현 플라스미드를 구축할 수 있다.

본 시스템은 B. subtilis 분비 시그널 펩티드 DNA library인 SP DNA mixture, B. subtilis -E. coli shuttle vecctor pBE-S DNA 및 단백질 발현용 숙주B.subtilis RIK1285가 포함되어 있다. SP DNA mixture는 173종류의 B. subtilis유래 분비 시그널 펩티드를 코딩 하는 DNA단편 (In-Fusion클로닝용)의 혼합물이다. pBE-S DNA에는 B. subtilis에서 기능하는 pUB110유래의 복제ori (pUBori)와 kanamycin 내성유전자 (Kanr) E. coli에서 기능하는 pUC유래의 복제ori (ColE1 ori)과 ampicillin내성유전자 (Ampr)가 포함되어 있다. 게다가, B. subtilis 유래의 subtilisin 프로모터 (aprE promoter)와 분비 시그널 펩티드 (aprE SP)를 포함하고, 그 하류에 multicloning site (MCS) 및 His태그 배열이 배치되어 있다.
MCS에 목적유전자를 삽입한 pBE-S DNA를 제한효소 Mlu I와 Eco52 I로 절단하여 선형화한 후, Clontech사의 In-Fusion클로닝 (cloning) 시스템으로 aprE SP의 대신SP DNA mixture중의 173종류의 분비 시그널 펩티드DNA의 library를 도입하는 것에 의해 (그림 참조), 목적 단백질에 적합한 고분비 발현계 스크리닝이 가능하다. MCS는 대장균 Cold shock 발현계 pCold 벡터 (TaKaRa Code 3360 3365, 3371)와 같은 배열 때문에, 쉽게 목적 유전자를 넣어 조작할 수 있다. 본 키트에 첨부된 숙주B. subtilis RIK1285는 2종류의 프로테아제 생산능력이 없기 때문에, 목적 단백질의 분비 발현에 적합하다.


그림. pBE-S DNA 벡타맵
사용상의 주의
  • 본 키트는 In-Fusion Advantage PCR Cloning Kit와 함께 사용하십시오. 또한, 고효율 형질 전환체를 얻기 위하여, E. coli HST08 Premium Competent Cell을 사용하는 것이 좋습니다.
  • SP DNA mixture는 PCR 증폭한 DNA fragment를 혼합하여 조제하고 있습니다. 따라서 빈도는 낮지만 primer dimer 등의 PCR 증폭 부산물이 복제되는 경우가 있습니다.






Keyword :
-
Brevibacillus/Bacillus 발현계
효과적인 분비발현계의 구축 및 Screening
> B. subtilis Secretory Protein Expression System
> Brevibacillus 균체 내 발현 Vector
분비 단백질의 대량 생산에 최적
> Brevibacillus 분비 발현 시스템
효율적 분비 발현 실험이 가능한
> Brevibacillus In vivo Cloning 방법(BIC 법)
-