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다양한 AAV serotype의 빠르고 정확한 역가 측정

Titration Kit (qPCR)

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)		 비고 사용자매뉴얼
Takara
 6233
 AAVpro® Titration Kit (for Real Time PCR)
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스  		100 회
 682,000원  6233_e.v1903Da.pdf
Takara
 6235
 AAVpro® Extraction Solution
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스  		1 Set
 206,000원  6235_e.v1509Da.pdf



  • AAV2 ITR 유래의 다양한 AAV serotype 정량 가능
  • 빠르고 간편하게 약 2.5시간만에 AAV 정량 완료
  • 일반적인 DNA blot 또는 ELISA 방법 대비 정확한 titration 측정 가능
  • Packaging cell line에서 AAV 추출, Real Time PCR까지 필요한 모든 구성품 포함
제품 설명
Adeno-Associated Virus (AAV)는 분열, 비분열 세포에 유전자 도입이 가능하며, 특히 비분열 세포에 대해 장기간 유전자 발현이 가능하다. 또한 면역원성 (immune response)이 낮아 in-vivo 실험에 최적화된 virus이다.
AAV의 역가측정은 일관된 실험 결과와 감염 조직 및 감염 방법에 최적인 AAV의 양의 결정을 위해 매우 중요하다.

1. AAVpro® Titration Kit (for Real Time PCR) Ver.2 (Code 6233)

AAVpro® Titration Kit (for Real Time PCR)은 다카라가 독자적으로 개발한 Real Time PCR방식의 titration 방법을 사용하여, 빠르고 효율적으로 AAV의 역가를 측정할 수 있다. 본 제품에는 AAV packaging cell line으로부터 AAV를 추출하여, Real Time PCR 정량을 위한 시약까지 모두 포함되어 있다. AAV의 vector 양 말단에 존재하는 ITR (Inverted Terminal Repeat)을 target으로 AAV의 genome을 검출하기 때문에, 기존의 DNA blot 또는 ELISA 법에 비해 빠르고 정확한 결과를 얻을 수 있으며, 다양한 AAV serotype*1에 적용할 수 있다.
*1 AAV2유래의 ITR (일반적으로 사용)을 검출하므로, ITR영역이 AAV2로부터 유래한 서열이면 serotype에 관계없이 정량 가능하다.


그림 1. AAVpro® Titration Kit (for Real Time PCR) Ver.2 workflow


그림 2. AAVpro® Titration Kit (for Real Time PCR)의 Titer 측정 효율 비교.
AAV1, 2, 6를 생산하는 packaging cell line으로부터 AAVpro® Extraction Solution을 사용하여 AAV를 추출하였다. 그 후, AAV의 ITR 과 CMV 부분을 각각 타겟하여 Real Time PCR의 정량값을 비교하였다 (ITR: AAVpro® Titration Kit (for Real Time PCR) Ver.2). 본 데이터는, AAVpro® Titration Kit가 AAV2 ITR 유래의 다양한 serotype AAV 정량에 이용 가능하다는 것을 나타낸다.

2. AAVpro® Extraction Solution (Code 6235)
다카라가 독자적으로 개발한 AAV extraction시약으로, 기존의 freeze/thaw 또는 sonication법과 같이 번거로운 과정없이 빠르고 효율적으로 AAV packaging cell line으로부터 AAV를 추출할 수 있다 (특허 출원 중). 본 제품은 다양한 serotype의 AAV에 사용 가능하며, 숙주 (host) 유래 단백질과 핵산 오염이 낮은 AAV를 추출 가능하다.

[관련 제품]
<AAVpro® Purification Kit>
일반적인 AAV 정제 방법인CsCl2/iodixanol gradient ultracentrifugation 법은 고도의 숙련된 기술을 필요로 하며, 바이러스 회수율이 낮고, 추출된 AAV의 낮은 감염성과 시간이 오래 소요되는 단점이 있다. 
AAVpro® Purification Kit를 사용하면 약 4시간만에 편리하고, 빠르게 AAV를 정제 할 수 있다.
내용
AAVpro® Titration Kit (for Real Time PCR) Ver.2 (Code 6233, 100 회)
1.

AAV 추출

 

AAV Extraction Solution A

1.5 ㎖× 2

 

AAV Extraction Solution B

300 ㎕

2.

AAV genome 간이추출 (100 샘플분)

 

 

DNase I

100 ㎕

 

10×DNase I Buffer

200 ㎕

 

Lysis Buffer

1 ㎖× 2

3.

Real Time PCR (100 rxns: 25 μl 반응시)

 

 

TB Green™ Premix Ex Taq II

625 ㎕× 2

 

AAV Forward Titer Primer

20 ㎕

 

AAV Reverse Titer Primer

20 ㎕

 

dH2O

1 ㎖× 3

 

ROX Reference Dye

50 ㎕

 

ROX Reference Dye II

50 ㎕

 

Positive Control

50 ㎕

 

EASY Dilution (for Real Time PCR)

1 ㎖× 5

AAVpro® Extraction Solution (Code 6235, 1 set)
1. AAV Extraction Solution A

25 ㎖

2.

AAV Extraction Solution B

2.5 ㎖
보존
AAVpro® Titration Kit (for Real Time PCR) Ver.2 (Code 6233)

TB Green™ Premix Ex Taq II: 4℃, 차광 (장기 보존시 -20℃, 융해 후에는 4℃ 보존)
그 외: -20 ℃ (AAV Extraction Solution A, B, Lysis Buffer는 융해 후는 실온 저장)

AAVpro® Extraction Solution (Code 6235) : 실온

Keyword : Adeno Associated Virus,in vivo,aav virus
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