• 정확한 Lentivirus 역가 측정으로 매우 일관성있는 Transduction (세포감염) 가능
• HIV-1 기반의 Lentivirus 역가를 신속하고 정확하게 정량
• 4시간 만에 정확하게 Lentivirus genome copy를 측정하는 qRT-PCR Kit
• HIV-1 p24 capsid protein을 ELISA 방식으로 역가 측정하는 p24 Rapid Titer Kit

Virus 역가 측정이 필요한 이유
    1. Lentivirus Packaging 반응이 제대로 되었는지 확인
    2. 오차없이 일관된 실험결과
    3. 100% Transduction을 위한 충분한 MOI 결정
    4. Copy number 조절을 통한 단백질 발현양 조절

Lenti-X™ qRT-PCR Titration Kit (Code 631235)
Lenti-X™ qRT-PCR Titration Kit는 간단하고 빠른 Real Time PCR 방법을 이용하여 Lentivirus 역가를 측정하는 제품이다. 본 제품은 Real Time PCR을 이용하여 Lentiviral genome copy를 측정하는 것은 물론, 신속한 RNA 정제 과정을 포함하고 있다.

특징 1. Rapid determination of lentiviral titer
이전에 사용되어왔던 Lentivirus 역가 측정 방법이 약 10일 정도가 소요되었던 반면, Real Time PCR을 사용하는 본 제품을 이용하면 모든 HIV-1 기반의 Lentivirus vector를 약 4시간 만에 정량할 수 있다. qRT-PCR 방법은 바이러스 회수 (virus harvest)와 목적세포 감염 (target cell infection) 까지의 시간을 획기적으로 감소시킬 수 있어, 바이러스 농축, 역가 측정, 감염까지 하루에 완료할 수 있다.

특징 2. Achieve consistent lentiviral transductions
Lentiviral gene-delivery의 주요한 장점은 목적세포에 도입되는 viral genome number를 예측가능한 Multiplicity of infection (MOI)를 예측함으로써 유전자 발현을 조절 가능하다는 점이다. 본 제품을 이용하면 Lentivirus gene copy number와 lentiviral infectivity 사이의 상관관계를 빠르게 결정할 수 있기 때문에, 실험간의 목적 유전자 발현을 보다 일관되게 조절 가능하다.

* 본 제품 내에 포함된 primer는 Packaging Signal에 인접한 HIV-1 genome 영역을 증폭할 수 있도록 디자인되어 있습니다. 본 프라이머는 다카라바이오에서 판매하는 모든 Lentivirus vector 뿐만 아니라 일반적으로 사용되는 HIV-1 based lentiviral vector에 호환 가능합니다. 만약, vector compatibilty를 확인하고자 한다면, 고객지원센터 (TEL. 02-2081-2510)로 연락 바랍니다.


그림 1. Lenti-X and Retro-X qRT-PCR kitration kits offer the fastest titration methods.
Standard transduction-based titration methods require up to 10 days to complete.The Lenti-X and Retro-X qRT-PCR titration kits require only 4 hr, which enables virus harvest, titration, and infection of target cells to all be performed on the same day.


그림 2. Flowchart of the procedures for titrating lentivirus supernatants using the Lenti-X qRT-PCR Titration Kit.

Lenti-X™ p24 Rapid Titer Kit (Code 632200)
Lenti-X™ p24 Rapid Titer Kit는 바이러스 상층액 내에 존재하는 p24 capsid protein의 잔존량을 측정하는 특이성 높은 ELISA법을 이용한다. 이 때 측정하는 p24 capside protein은 바이러스 역가와 직접적인 상관관계가 있다. 상층액에 존재하는 바이러스는 제품 내 포함된 lysis buffer로 용해한다. 그 후, murine anti-p24 antibody가 코팅된 96-well microtiter plate에 용해된 샘플을 처리 및 washing을 진행한다. 특이적으로 결합된 p24 protein을 biotinylated anti-p24 secondary antibody, streptavidine-HRP (horseradish peroxidase) 및 발색 시약으로 반응시킨다. 본 제품은 standard curve를 작성할 수 있는 p24 control을 포함하고 있다.


그림 3. Schematic of the Lenti-X p24 Rapid Titer Procedure. p24 from the culture supernatant is lysed and bound to anti-p24 coated wells and detected using a combination of biotinylated anti-p24 secondary antibody, streptavidin-HRP, and a color reagent.

구성품 (자세한 내용은 CoA를 참조하세요)

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