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AAV를 효율적으로 농축

AAVpro® Concentrator

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)		 비고 사용자매뉴얼
Takara
 6674
 AAVpro® Concentrator
관련학술 구매하기 		1 Kit
(Package) 		659,000원  6674_e.v2001.pdf

제품 설명
Adeno-Associated Virus (AAV)는 분열, 비분열 세포에 유전자 도입이 가능하며, 특히 비분열 세포에 대해 장기간 유전자 발현이 가능하다. 특히, 면역원성 (immune response)이 낮아 in vivo 실험에 최적화된 virus이다.

실험목적에 따라 AAV의 정제과정 중 농축 또는 buffer 교환이 필요한 경우가 있는데, 특히 in vivo 실험시 AAV 투여량은 대상 동물이나 투여 방법에 따라 달라질 수 있고, mouse 등 개체가 작은 동물에 주입하는 경우 투여할 수 있는 volume이 제한되므로 고농도의 AAV를 조제할 필요가 있다.

본 제품은 간편하고 효율적으로 AAV를 농축할 수 있는 시약으로 AAV producing cell 상층액 (혈청 유무에 관계없음)의 농축이나 AAV를 포함하는 용액의 buffer교환 등 다양한 용도로 사용할 수 있다.


그림 1. AAVpro® Concentrator를 사용한 AAV 농축 workflow
내용

1.

Concentrating solution A

16 ㎖

2.

Concentrating solution B

80 ㎖

3.

Dissolving solution

16 ㎖

4.

Washing solution

30 ㎖× 2개

5.

Millex-HV 0.45μm

4개

6.

Amicon Ultra-15, 100 kDa

2개

보존
Concentrating solution B: 4℃
그 외 구성품: 실온
AAV 농축 예
[Serum free 배양 상층액의 AAV 농축 예]
형광단백질 ZsGreen1을 포함한 AAV1 producing cell의 배양상층액 40 ㎖ (T225 flask 1 개 분량)을 본 제품을 이용하여 200 ㎕로 농축하였다. 그 후 AAVpro® Titration Kit (for Real Time PCR) (Code 6233)을 이용하여 역가를 측정하고 회수율을 확인하였다.


[농축된 AAV의 biological titer 측정]
농축 전 후의 AAV1-ZsGreen1을 이용하여 HT1080 cell에 감염, 역가를 측정하였다. 5,000 vg/cell과 500 vg/cell로 AAV를 감염시키고 3일 후에 flow cytometry로 분석한 결과, 본 제품으로 농축된 AAV는 감염 능력을 보유하고 있음을 확인하였다.
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