Á¦Ç°¼³¸í
SpeedSTAR¢â HS DNA Polymerase´Â °í¼Ó PCR¿ëÀ¸·Î °³¹ßµÈ Hot Start DNA polymerase·Î, ÃÖÀûÈµÈ Fast Buffer I ¶Ç´Â IIÀ» »ç¿ëÇÏ¿© °í¼Ó PCRÀ» ÁøÇàÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù.
ÀϹÝÀûÀÎ PCR¿ë DNA polymerase´Â 1ºÐ/kb¸¦ ±âÁØÀ¸·Î extension ½Ã°£À» ¼³Á¤ÇÏÁö¸¸, º» Á¦Ç°Àº 10ÃÊ/kbÀÇ ¼³Á¤ÀÌ °¡´ÉÇÏ´Ù. ¾çÈ£ÇÑ ¹ÝÀÀ¼ºÀ» À¯ÁöÇÏ¸é¼ PCRÀÇ °¢ step,
ƯÈ÷ extension ½Ã°£À» ´ÜÃàÇÒ ¼ö Àֱ⠶§¹®¿¡ ´Ü½Ã°£¿¡ PCR °á°ú¸¦ ¾òÀ» ¼ö ÀÖ´Ù. ¶Ç, anti-Taq antibody¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ Hot Start È¿¼Ò·Î, cycling ÀüÀÇ mis-annealingÀ̳ª
primer dimer¿¡ ÀÇÇÑ ºñƯÀÌÀû ÁõÆøÀ» ¾ïÁ¦ÇÏ¿© ƯÀ̼ºÀÌ ³ôÀº ÁõÆø °á°ú¸¦ ¾òÀ» ¼ö ÀÖ´Ù.
³»¿ë
1. |
SpeedSTAR HS DNA Polymerase (5 U/§¡) |
50 §¡ |
2. |
10¡¿ Fast Buffer I (30 mM Mg2+ plus) *1 |
1 §¢ |
3. |
10¡¿ Fast Buffer II (20 mM Mg2+ plus)*1 |
1 §¢ |
4. |
dNTP Mixture (°¢ 2.5 mM) |
800 §¡ |
*1 Mg
2+ ³óµµ´Â Fast Buffer I °¡ 30 mM (10 ¡¿), Fast Buffer II °¡ 20 mM (10 ¡¿)ÀÔ´Ï´Ù
º¸Á¸ -20¡É
÷ºÎ ¹öÆÛ¿¡ ´ëÇØ
º» Á¦Ç°¿¡´Â 2 Á¾·ùÀÇ buffer (10¡¿ Fast Buffer I, 10¡¿ Fast Buffer II)°¡ ÷ºÎµÇ¾î ÀÖ´Ù. ÁõÆø »ê¹°ÀÇ ±æÀÌ¿¡ µû¶ó ±¸ºÐÇÏ¿© »ç¿ëÇÏ´Â °ÍÀ» ±ÇÀåÇÑ´Ù.
ÁõÆø»ê¹°ÀÇ ±æÀÌ¿¡ µû¶ó 2 kb ÀÌÇÏ´Â Fast Buffer I, 2 ~ 4 kb´Â I ¶Ç´Â II, 4 kb À̻󿡴 Fast Buffer II¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© ÃÖÀûÀÇ È¿À²À» ¾òÀ» ¼ö ÀÖ´Ù.
½ÇÇè ¿¹ - Fast PCR ¼º´É È®ÀÎ
SpeedSTAR HS ¹× TaKaRa Ex Taq HS¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© E. coli genomic DNA¸¦ ÁÖÇüÀ¸·Î ´Ù¾çÇÑ Å©±âÀÇ À¯ÀüÀÚ¸¦ 2 step PCR·Î ÁõÆøÇÑ °á°ú, SpeedSTAR HS¸¦
ÀÌ¿ëÇÏ¿´À» ¶§ ÀûÀº ¼Ò¿ä½Ã°£À¸·Î ¾çÈ£ÇÑ ÁõÆøÀ» È®ÀÎÇÒ ¼ö ÀÖ¾ú´Ù.

ÁõÆø±æÀÌ |
SpeedSTAR HS |
TaKaRa Ex Taq HS |
1, 2 kb |
94 ¡É |
1 min |
|
94 ¡É |
1 min |
|
95 ¡É |
5 sec |
30 cycles |
98 ¡É |
10 sec |
30 cycles |
65 ¡É |
20 sec |
68 ¡É |
2 min |
Fast Buffer I »ç¿ë |
|
¼Ò¿ä½Ã°£ 33ºÐ |
¼Ò¿ä½Ã°£ 96ºÐ |
4, 6 kb |
94 ¡É |
1 min |
|
94 ¡É |
1 min |
|
95 ¡É |
5 sec |
30 cycles |
98 ¡É |
10 sec |
30 cycles |
65 ¡É |
60 sec |
68 ¡É |
6 min |
Fast Buffer II »ç¿ë |
72 ¡É |
10 min |
|
¼Ò¿ä½Ã°£ 53ºÐ |
¼Ò¿ä½Ã°£ 3½Ã°£ 46ºÐ |
8, 10 kb |
94 ¡É |
1 min |
|
94 ¡É |
1 min |
|
98 ¡É |
5 sec |
30 cycles |
98 ¡É |
10 sec |
30 cycles |
68 ¡É |
2 min |
68 ¡É |
10 min |
Fast Buffer II »ç¿ë |
72 ¡É |
10 min |
|
¼Ò¿ä½Ã°£ 83ºÐ |
¼Ò¿ä½Ã°£ 5½Ã°£ 46ºÐ |
18, 20 kb |
94 ¡É |
1 min |
|
94 ¡É |
1 min |
|
98 ¡É |
5 sec |
30 cycles |
98 ¡É |
10 sec |
30 cycles |
68 ¡É |
5 min |
68 ¡É |
15 min |
72 ¡É |
5 min |
|
72 ¡É |
10 min |
|
Fast Buffer II »ç¿ë |
|
|
|
¼Ò¿ä½Ã°£ 3½Ã°£ 29ºÐ |
¼Ò¿ä½Ã°£ 8½Ã°£ 16ºÐ |
ÁõÆø »ê¹°ÀÇ ¸»´Ü
SpeedSTAR¢â HS DNA Polymerase¸¦ ÀÌ¿ëÇØ ÁõÆøÇÑ PCR »ê¹°ÀÇ ´ëºÎºÐÀº 3£§¸»´Ü¿¡ A°¡ 1 ¿°±â ºÎ°¡µÇ¾î ÀÖ´Ù. µû¶ó¼ PCR »ê¹°À» Á÷Á¢ T-Vector (pMD20 (Code 3270), pMD19 (Simple) (Code 3271) µî) ¶Ç´Â Mighty TA-cloning Kit (Code 6028)À» ÀÌ¿ëÇÏ¿© cloningÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù.
¶Ç, Mighty Cloning Reagent Set (Blunt End) (Code 6027)·Î
ÆòȰ ¸»´ÜÈ ¹× Àλêȸ¦ 󸮸¦ ÇÏ¿©, ÆòȰ ¸»´Ü vector¿¡µµ cloningÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù.