제품설명
SpeedSTAR™ HS DNA Polymerase는 고속 PCR용으로 개발된 Hot Start DNA polymerase로, 최적화된 Fast Buffer I 또는 II을 사용하여 고속 PCR을 진행할 수 있다.
일반적인 PCR용 DNA polymerase는 1분/kb를 기준으로 extension 시간을 설정하지만, 본 제품은 10초/kb의 설정이 가능하다. 양호한 반응성을 유지하면서 PCR의 각 step,
특히 extension 시간을 단축할 수 있기 때문에 단시간에 PCR 결과를 얻을 수 있다. 또, anti-Taq antibody를 이용한 Hot Start 효소로, cycling 전의 mis-annealing이나
primer dimer에 의한 비특이적 증폭을 억제하여 특이성이 높은 증폭 결과를 얻을 수 있다.
내용
1. |
SpeedSTAR HS DNA Polymerase (5 U/㎕) |
50 ㎕ |
2. |
10× Fast Buffer I (30 mM Mg2+ plus) *1 |
1 ㎖ |
3. |
10× Fast Buffer II (20 mM Mg2+ plus)*1 |
1 ㎖ |
4. |
dNTP Mixture (각 2.5 mM) |
800 ㎕ |
*1 Mg
2+ 농도는 Fast Buffer I 가 30 mM (10 ×), Fast Buffer II 가 20 mM (10 ×)입니다
보존 -20℃
첨부 버퍼에 대해
본 제품에는 2 종류의 buffer (10× Fast Buffer I, 10× Fast Buffer II)가 첨부되어 있다. 증폭 산물의 길이에 따라 구분하여 사용하는 것을 권장한다.
증폭산물의 길이에 따라 2 kb 이하는 Fast Buffer I, 2 ~ 4 kb는 I 또는 II, 4 kb 이상에는 Fast Buffer II를 사용하여 최적의 효율을 얻을 수 있다.
실험 예 - Fast PCR 성능 확인
SpeedSTAR HS 및 TaKaRa Ex Taq HS를 이용하여 E. coli genomic DNA를 주형으로 다양한 크기의 유전자를 2 step PCR로 증폭한 결과, SpeedSTAR HS를
이용하였을 때 적은 소요시간으로 양호한 증폭을 확인할 수 있었다.
증폭길이 |
SpeedSTAR HS |
TaKaRa Ex Taq HS |
1, 2 kb |
94 ℃ |
1 min |
|
94 ℃ |
1 min |
|
95 ℃ |
5 sec |
30 cycles |
98 ℃ |
10 sec |
30 cycles |
65 ℃ |
20 sec |
68 ℃ |
2 min |
Fast Buffer I 사용 |
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소요시간 33분 |
소요시간 96분 |
4, 6 kb |
94 ℃ |
1 min |
|
94 ℃ |
1 min |
|
95 ℃ |
5 sec |
30 cycles |
98 ℃ |
10 sec |
30 cycles |
65 ℃ |
60 sec |
68 ℃ |
6 min |
Fast Buffer II 사용 |
72 ℃ |
10 min |
|
소요시간 53분 |
소요시간 3시간 46분 |
8, 10 kb |
94 ℃ |
1 min |
|
94 ℃ |
1 min |
|
98 ℃ |
5 sec |
30 cycles |
98 ℃ |
10 sec |
30 cycles |
68 ℃ |
2 min |
68 ℃ |
10 min |
Fast Buffer II 사용 |
72 ℃ |
10 min |
|
소요시간 83분 |
소요시간 5시간 46분 |
18, 20 kb |
94 ℃ |
1 min |
|
94 ℃ |
1 min |
|
98 ℃ |
5 sec |
30 cycles |
98 ℃ |
10 sec |
30 cycles |
68 ℃ |
5 min |
68 ℃ |
15 min |
72 ℃ |
5 min |
|
72 ℃ |
10 min |
|
Fast Buffer II 사용 |
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소요시간 3시간 29분 |
소요시간 8시간 16분 |
증폭 산물의 말단
SpeedSTAR™ HS DNA Polymerase를 이용해 증폭한 PCR 산물의 대부분은 3＇말단에 A가 1 염기 부가되어 있다. 따라서 PCR 산물을 직접 T-Vector (pMD20 (Code 3270), pMD19 (Simple) (Code 3271) 등) 또는 Mighty TA-cloning Kit (Code 6028)을 이용하여 cloning할 수 있다.
또, Mighty Cloning Reagent Set (Blunt End) (Code 6027)로
평활 말단화 및 인산화를 처리를 하여, 평활 말단 vector에도 cloning할 수 있다.
