- Tat-independent한 3세대 lentivirus packaging system
- HIV-1 유래 서열을 최대한 제거하여 안전성을 향상, 임상 연구에 최적
- 5’ LTR U3 부위가 CMV promoter로 대체되어, tat trans-activator 없이도 virus 생산 가능
- 3’ LTR 일부 결손으로 self-inactivation (SIN) 되어, 바이러스 자가 복제 방지
- 고역가 lentivirus 생산을 위해 최적화된 LVpro™ Packaging Mix와 함께 사용 (Code 6195, 별도구매 가능)
- 안정적인 형질전환체 selection을 위한 puromycin 내성 유전자 포함
※ 본 제품은 Cloning을 위해 In-Fusion
® 시약을 함께 사용할 수 있으며, 원활한 결과를 얻기 위해
제품 사용 전 In-Fusion® 원리(동영상링크)를 반드시 참고해주시기 바랍니다.
제품 설명
LVpro™ Packaging Mix는 여러 개의 packaging plasmid (env, gag, pol, rev 발현)를 premix 형태로 제공하며, 연구자가 실험 조건 최적화 과정을 거치지 않고도 높은 역가의 lentivirus를 생산할 수 있다. 본 제품은 HIV-1 유래의 tat 서열을 제거하고 5’ LTR의 U3 부위는 CMV promoter로 대체하여 tat-independent한 lentivirus를 생산할 수 있다. 3세대 lentiviral vector인 pLVpro vector plasmid와 함께 packaging cell에 co-transfection하여 생산된 바이러스는 HIV-1 유래의 Gag, Pol, Rev 단백질과 VSV-G envelope을 일시적으로 발현한다.
pLVpro vector plasmid로부터 전사된 재조합 바이러스 RNA는 완전한 viral particle로 만들어지며 (그림 1), 바이러스 제작을 위한 transfection 시에는 보다 높은 역가의 바이러스를 생산하도록 구축된 Lenti-X™ 293T Cell Line (Code 632180)과 functional한 바이러스 생산 효율을 높여주는 TransIT®-VirusGEN™ Transfection Reagent (Code MIR 6700)을 추천한다.
그림 1. LVpro™ Packaging Mix 와 Lenti-X 293T 세포를 이용한 lentivirus 생산 workflow
타겟 유전자를 포함하는 pLVpro lentiviral vector plasmid와 LVpro™ Packaging Mix를 co-transfection하면 (Step 1), 재조합 lentiviral genomic RNA 전사체와 바이러스 패키징 단백질이 생성된다 (Step 2). 재조합 viral RNA genomic의 패키징 서열 (Ψ)이 패키징 단백질에 의해 인식되면 (Step 3), 재조합 viral RNA genome이 패키징 단백질과 통합되어 viral core를 형성하고, 이 형성된 core는 세포막으로 이동한다 (Step 4). 이 core는 VSV-G envelope 단백질을 포함하는 세포막으로 감싸지며, 성숙하고 감염성 있는 virions (바이러스 입자)가 세포에서 배양배지로 방출된다 (Step 5). 그 후 바이러스 입자는 배양 배지에서 회수할 수 있다 (Step 6). 회수된 바이러스 입자는 감염성은 가지지만, 표적 세포에서의 자가 복제나 증식에 필요한 여러 유전자가 결핍되어 있다. 또한 바이러스 단백질 발현에 여러 개로 나누어진 플라스미드가 사용되기 때문에, 복제 가능한 바이러스를 생성하기 어렵고 매우 안전한 바이러스만을 생산할 수 있게 된다.
그림 2. Puromycin 내성 유전자 유무에 따른 표적 유전자 발현
Puromycin과 같은 내성유전자를 lentivirus 벡터에 삽입하면 일반적으로 타겟 유전자 발현이 감소할 수 있다고 알려져 있다. pLVpro-EF1α-ZsGreen1-Pur 벡터와 pLVpro-EF1α-ZsGreen1 벡터를 각각 LVpro™ Packaging Mix와 함께 co-transfect하여 lentivirus를 얻었다. 생성된 ZsGreen1 발현 lentivirus을 transduction하여 ZsGreen1-positive 세포의 발현 강도를 유세포 분석기를 사용하여 측정하였다. Puromycin 내성 유전자를 포함하는 pLVpro-EF1α-ZsGreen1-Pur는 그렇지 않은 벡터의 약 80% ZsGreen1 발현이 관찰되었다.
Vector 정보
Vector |
길이 |
사용가능한 제한효소 사이트 (MCS) |
pLVpro-CMV-Pur Vector |
7,493 bp |
BamH I, Sse8387 I, Not I, Mlu I, Xho I, Apa I, Smi I, Xba I |
pLVpro-EF1α-Pur Vector |
8,170 bp |
BamH I, Sse8387 I, Not I, Mlu I, Smi I, Xba I |
pLVpro-CMV-ZsGreen1-Pur Vector |
8,201 bp |
Control 및 비교군으로서 형광 단백질을 발현함. (별도 유전자 삽입 불가) |
pLVpro-EF1α-ZsGreen1-Pur Vector |
8,878 bp |
Vector 서열 (vector명 클릭 시 .fasta data 다운 가능)
보관 : - 20 ℃
관련제품
- Functional한 바이러스를 더 많이 생산하는 transfection 시약: TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent (Code MIR 6700)
- 고효율 lentivirus packaging cell line: Lenti-X™ 293T Cell Line(Code 632180)
- 바이러스 농도가 낮을 때, 농축 시약: Lenti-X™ Concentrator (Code 631231)
- ELISA법으로 간단하게 lentivirus 역가 측정: Lenti-X™ p24 Rapid Titer Kit (Single Wash) (Code 631476)
- 다양한 cell-line에 편리하게 transduction: Lenti-X™ Transduction Sponge (Code 631478)
- Retrovirus/Lentivirus Transduction enhancer: RetroNectin® (Recombinant Human Fibronectin Fragment)
