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1.5시간이면 배양세포에서 Real Time PCR 결과 확인

RNA 추출없이 cell direct qPCR

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	3735S	CellAmp™ Direct TB Green® RT-qPCR Kit	1 Kit	252,000원 ~~315,000원~~	02.26 ~ 04.19	,
Takara	3735A	CellAmp™ Direct TB Green® RT-qPCR Kit	1 Kit	948,800원 ~~1,186,000원~~	02.26 ~ 04.19	,
Takara	3736A	CellAmp™ Direct Probe RT-qPCR Kit	1 Kit	886,400원 ~~1,108,000원~~	02.26 ~ 04.19	,
Takara	3737S	CellAmp™ Direct Lysis and RT set	1 Set (20 회)	151,200원 ~~189,000원~~	02.26 ~ 04.19	,
Takara	3737A	CellAmp™ Direct Lysis and RT set	1 Set (100 회)	607,200원 ~~759,000원~~	02.26 ~ 04.19	,
Takara	3738A	CellAmp™ Direct Lysis set	1 Kit (Lysis 100회)	281,600원 ~~352,000원~~	02.26 ~ 04.19	,
Takara	3739A	CellAmp™ Direct RT Enzyme set	1 Kit (RT 100회)	486,400원 ~~608,000원~~	02.26 ~ 04.19	,

Product index

Overview
qPCR Preamplification
- PreAmp Master Mix
Real Time PCR 기기
cDNA 합성 (Real Time PCR ..
Intercalator TB Green 검출
Dual-Labeled Probe 검출
Cell direct qPCR
TB Green 검출(Clontech)
- TB Green® Advantage q..
- Terra qPCR Direct TB G..
CycleavePCR 검출

제품 설명

본 제품은 96 well 혹은 다양한 형태의 plate에서 배양된 동물세포 (adherent cells, non-adherent cells, primary cells, stem cells, iPS cells 등)로부터 RNA 추출 과정 없이 간단한 방법으로 2-step Real Time RT-PCR을 수행 할 수 있다.
본 제품을 사용하면 배양세포에서 template RNA 조제, 역전사반응, Real Time PCR까지 약 1.5시간이 소요되며, genomic DNA를 효과적으로 제거할 수 있기 때문에 genomic DNA의 혼입이 분석에 영향을 미치는 경우 (Exon 접합의 primer 디자인이 불가능한 경우, 저발현 유전자를 해석하는 경우 등)에도 유용하다.
Intercalater (TB Green^®) 검출법 또는 Dual Labeled-probe 검출법을 위한 2 step Real Time RT-PCR 시약이 함께 구성되어 있어, 편리하게 유전자 발현 해석을 진행할 수 있다.
* #3737S/A는 #3735S/A, #3736S/A의 구성품입니다.
자세한 제품사용은 #3735 또는 #3736의 매뉴얼 VI. Protocol, VI-1. ~ VI-3. (Cell lysis ~ Reverse Transcription Reaction)을 참고 바랍니다.
* #3735S/A, #3736S/A의 Real Time PCR 시약은 아래의 제품으로 구매하실 수 있습니다.
- 3735A/B의 경우: TB Green^® Fast qPCR Mix (Code RR430A/B)
- 3736A/B의 경우: Probe qPCR Mix (Code RR391A/B)

제품 특징

1. 약 1.5시간에 고효율로 유전자 발현 분석 가능
본 제품을 사용하면 Real Time PCR 주형을 RNA의 정제 과정 없이 세포로부터 직접 준비가 가능하다. 또한, 기존의 제품 (CellAmp™ Direct RNA Prep Kit for RT-PCR (Real Time) Code 3732)와 달리, 역전사 과정 전 DNase inactivation을 위한 열처리 과정이 필요 없다. 또한 실험 절차가 간단하여, 고효율(high-throughput)분석에 적합한 제품이다.
2. 줄기세포(예: iPS cells)로 분화된 세포의 분석시 적합
본 제품은 향상된 Lysis Buffer II를 사용하여 다양한 형태의 세포주(adherent cells, non-adherent cells, primary cells, stem cells, iPS cells, etc)에 사용 가능하다.
3. 세포 용해물(Cell lysates) 장기간 보관 가능
본 제품으로 제조한 세포 용해물은 -20℃에서 최대 6개월 보관 가능하다.
4. 높은 정확도와 PCR 억제물질에 대한 저항성
본 제품에 사용된 TB Green^® Fast qPCR Mix (Code RR430)와 Probe qPCR Mix (Code RR391)은 PCR 억제물질에 강력한 저항성을 가지고 있으며, GC-rich template에서도 높은 정확도를 나타낸다.

Work flow

내용

	구성품명	3735A / 3736A	3737A	3738A	3739A	3735S / 3736S	3737S
1.	CellAmp Washing Buffer^*1	2.5 ㎖ × 5	2.5 ㎖ × 5	2.5 ㎖ × 5	-	2.5 ㎖	2.5 ㎖
2.	CellAmp Lysis Buffer II^*1	1 ㎖ × 5	1 ㎖ × 5	1 ㎖ × 5	-	1 ㎖	1 ㎖
3.	DNase I for Direct RNA Prep^*1	200 ㎕	200 ㎕	200 ㎕	-	40 ㎕	40 ㎕
4.	Stop Solution^*1	250 ㎕	250 ㎕	250 ㎕	-	50 ㎕	50 ㎕
5.	PrimeScript RT Enzyme Mix^*2	200 ㎕	200 ㎕	-	200 ㎕	40 ㎕	40 ㎕
6.	5 × CellAmp Buffer II^*2	400 ㎕	400 ㎕	-	400 ㎕	80 ㎕	80 ㎕
7.	RT Primer Mix^*2,3	100 ㎕	100 ㎕	-	100 ㎕	20 ㎕	20 ㎕
8.	RNase Free H₂O^*2	1 ㎖ × 2	1 ㎖ × 2	-	1 ㎖ × 2	1 ㎖	1 ㎖
9.	TB Green^® Fast qPCR Mix (2×) (3735A/S)^4 또는 Probe qPCR Mix (2×) (3735A/S)^4	625 ㎕ × 10	-	-	-	625 ㎕ × 2	-
10.	ROX Reference Dye (50×)^*5	250 ㎕	-	-	-	50 ㎕	-
11.	ROX Reference Dye II (50×)^*5	250 ㎕	-	-	-	50 ㎕	-

^*1	Cell Lysis 용 시약	3735A / 3736A / 3737A 100 회	3735S / 3736S / 3737S 20 회
^*2	RT (역전사) 시약	3735A / 3736A / 3737A 100 회	3735S / 3736S / 3737S 20 회
^*3	Oligo dT Primer, Random 6 mers를 포함한다.
^*4	qPCR 시약	3735A / 3736A 500 회	3735S / 3736S 100 회

^*5 Life Technologies의 Real Time PCR 장치 등 well 간 형광 신호를 보정하는 장치로 해석하는 경우에 사용하며, 자세한 내용은 제품매뉴얼을 참고.

iPS 세포 유래 심근세포를 사용한 실험 예

CellAmp™ Direct TB Green^® RT-PCR Kit (Code 3735)의 실험 예
<실험방법> iPS cells을 Cardiomyocyte로 분화 유도하며 5일, 18일, 42일 후 (각각 day 5, day 18, day 42로 표기), 1x10⁴ cells을 harvest하여 본 제품의 프로토콜에 따라 cell lysate 50 ㎕를 조제하였다.
제시된 프로토콜에 따라 역전사 반응과 Real-Time PCR하여 유전자 발현 분석을 진행하고,
정제된 total RNA (1x10⁴ cells에서 추출) 를 control로 사용하여 동일한 방식으로 유전자 발현 분석을 진행하였다.

<결과> Day 5의 유전자 발현량을 1로 하여 Day 18과 Day 42의 유전자 발현량을 비교한 결과, 본 제품에서 조제한 cell lysate가 정제된 RNA를 사용한 경우와 동등한 유전자 발현 profile을 나타냄을 확인하였다.

CellAmp™ Direct Probe RT-qPCR Kit (Code 3736)의 실험 예
<실험방법> 다양한 세포 (HeLa, Jurkat, 239, normal human dermal fibrolast (NHDF))와 iPS cell로부터 분화된 cardiomyocyte (CM)를 각각 1x10⁴ cells로 harvest하여 본 제품의 프로토콜에 따라 cell lysate 50 ㎕를 조제하였다.
제시된 프로토콜에 따라 역전사 반응과 Real-Time PCR하여 유전자 발현 분석을 진행하고,
정제된 total RNA (1x10⁴ cells에서 추출) 를 control로 사용하여 동일한 방식으로 유전자 발현 분석을 진행하였다.

<결과> 본 제품에서 조제한 cell lysate가 정제된 RNA를 사용한 경우와 동등한 유전자 발현 profile을 나타냄을 확인하였다.

보존 -20℃

CellAmp Washing Buffer 및 CellAmp Lysis Buffer II
융해 후 4℃에 보관하시고, 오염에 주의 하십시오.

3735S / A : TB Green^® Fast qPCR Mix(2x)
4℃ 보관시 6개월 안정하며, 반드시 차광하여 보관 하십시오.
- 장기 보존의 경우는 -20 ℃에서 보관하십시오. 한번 해동한 TB Green^® Fast qPCR Mix (2 x)는 4℃ 보관하고 6개월 안에 사용할 것을 권장합니다.
- 사용전 완전히 녹인 후 균일하게 혼합하여 사용하시기 바랍니다.

3736S / A : Probe qPCR Mix(2x)
4℃ 보관시 6개월 안정하며, 반드시 차광하여 보관 하십시오.
- 장기 보존의 경우는 -20 ℃에서 보관하십시오. 한번 해동한 Probe qPCR Mix (2 x)는 4℃ 보관하고 6개월 안에 사용할 것을 권장합니다.
- 사용전 완전히 녹인 후 균일하게 혼합하여 사용하시기 바랍니다.

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Cell direct qPCR

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1 개의 세포로부터 template cDNA를 증폭 가능

Whole Transcriptome 증폭시약