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Cloning용 ligase

T4 DNA Ligase

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
2011A
T4 DNA Ligase
관련학술 관심상품등록 구매하기
25,000 U
62,000원  2011A_DS.v1901Da.pdf
Takara
2011B
T4 DNA Ligase
관련학술 관심상품등록 구매하기
125,000 U
279,000원 

  • T4 DNA Ligase의 일반적인 사용 예
  • T4 DNA Ligase를 사용한 DNA 단편의 ligation 반응 결과의 예
제품설명
본 제품은 인접한 DNA 가닥의 5'-P 말단과 3'-OH 말단을 phosphodiester 결합으로 연결하는 효소이다. 보조인자로 ATP를 필요로 하고, 반응 중간산물로 enzyme-ATP complex가 만들어지며 이것이 DNA에 작용한다. 본 효소는 돌출말단 (cohesive end), 평활말단 (blunt end)을 연결하는 활성을 가지며, 또한 극히 낮지만 DNA와 RNA, RNA를 연결하는 활성도 가지고 있다.
보존 -20℃
농도 350 U/㎕
형태

10 mM

Tris-HCl (pH7.5)

50 mM

KCl

1 mM

DTT

0.1 mM

EDTA

50%

Glycerol

첨부 buffer 조성 (10x)

660 mM

Tris-HCl (pH7.6)

66 mM

MgCl2

100 mM

DTT

1 mM

ATP

활성의 정의
6 ㎍/20 ㎕의 λDNA-Hind III 분해물을 16℃, 30분 동안 90% 이상 연결하는 효소활성을 1 U으로 한다.
본 효소 1 U는 ATP-PPi 교환반응에 의한 0.008 Weiss Unit에 상당한다.
[활성 측정용 반응액 조성]

66 mM

Tris-HCl완충 용액 (pH7.6)

6.6 mM

MgCl2

10 mM

DTT

0.1 mM

ATP

6 ㎍/20 ㎕

λ DNA-Hind III 분해물

순도
- 2,000 U의 본 효소와 1 ㎍의 λDNA-Hind III 분해물을 37℃, 24시간 반응하여도 DNA의 전기영동 패턴에 변화가 일어나지 않는다.
- 2,000 U의 본 효소와 1 ㎍의 supercoiled pBR322 DNA를 37℃, 24시간 반응하여도 DNA의 전기영동 패턴에 변화가 일어나지 않는다.
- 2,000 U의 본 효소와 1 ㎍의 5S rRNA을 37℃, 24시간 반응하여도 RNA의 전기영동 패턴에 변화가 일어나지 않는다.
사용상의 주의
Ligation 반응은 말단 염기서열의 종류에 따라 반응속도가 다르다. 일반적으로 다음과 같은 경향이 있다.
  • Cohesive ends (돌출말단) ligation
    Hind III > Pst I > EcoR I > BamH I > Sal I
    (Hind III site는 Sal I site 보다 10~40배 빠르게 ligation한다.)
  • Blunt ends (평활말단) ligation
    Hae III >Alu I > Hinc II > Sma I
    (Hae III site는 Sma I site 보다 5~10배 빠르게 ligation한다.)
    EcoRV > Sca I > Pvu II >Nru I
기원
Escherichia coli carrying the plasmid that enables high expression of T4 DNA ligase gene
관련제품
- 실험목적별로 선택하는 Cloning Kit 선택가이드 - 링크
- DNA Ligation Kit 〈Mighty Mix〉 (Code 6023)
- Mighty TA-cloning Kit (Code 6028)
- Mighty TA-cloning Reagent Set for PrimeSTAR® (Code 6019)
T4 DNA Ligase와 E. coli DNA Ligase 특성 비교

 

T4 DNA Ligase

E. coli DNA Ligase

분자량

약 62,000

약 77,000

최적 pH

7.2~7.8

7.5~8.0

조효소 (coenzyme)

ATP

NAD

환원제

필요

불필요

평활말단의 연결

가능

불가능 (+PEG로 가능)

돌출말단의 연결

가능

가능







Keyword :
-
수식효소/Ligase
Cloned
> E. coli DNA Ligase
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> T4 DNA Ligase
> T4 RNA Ligase
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