• T4 DNA Ligase의 일반적인 사용 예
  
  [T4 DNA Ligase (Code 2011) 사용 예]
  
  1. Mixture를 조제한다
  

  10 x ligation buffer *1	2 ㎕
  Vector	50 ng
  Insert	vector : insert = 1:1~1:10 사이에서 검토*2
  T4 DNA ligase (350U/㎕)	1㎕
  D.W	Up to 20 ㎕
  Total	20 ㎕

  ^*1: T4 DNA Ligase (Code 2011A/B)에 포함
  ^*2: DNA size, vector 탈인산화 유무, DNA 말단의 형태에 따라 최적의 비율이 다름
  
  2. 반응조건 ^*3
  - Cohesive말단 (돌출 말단)의 경우 16℃, 1~5시간 반응
  - Blunt말단 (평활 말단)의 경우 16℃, 1~24시간 반응
  ^*3: Ligation이 효율이 낮은 경우 반응시간을 증가 가능. 장시간 (16시간 이상) 반응하는 경우 4℃ 반응도 가능
  
  3. 형질전환 ^*4
  - 반응액 일부를 형질전환에 이용
  - 반응액을 보존하는 경우 -20℃로 저장할 것.
  ^*4: Electroporation 등 필요에 따라 반응액을 페놀 추출/에탄올 침전 후, 다음 실험에 이용할 것
  
  본 내용은 다카라코리아의 일본 본사인 Takara Bio 홈페이지에서 발췌한 내용으로,
  원문은 T4 DNA Ligase Protocol (일문) 바로가기 링크를 참조 바랍니다.
  
  
• T4 DNA Ligase를 사용한 DNA 단편의 ligation 반응 결과의 예
  
  [T4 DNA Ligase (Code 2011A)를 사용한 DNA 단편의 ligation 반응 결과의 예]
  
  반응액 조성^{*
  *} 10 × Buffer 제품에 포함

  66 mM Tris-HCl (pH7.6)

  6.6 mM MgCl 2

  10 mM DTT

  0.1 mM ATP

  
  
  돌출 말단의 ligation 반응 예
  6 ㎍ / 20 ㎕의 λDNA- Hind III digest를 T4 DNA Ligase 1U를 첨가하여 16 ℃에서 10~60분 반응시켰다.
  
  

  그림 1. λDNA-Hind III 분해물의 Agarose gel 전기영동 결과

  0.7 % Agarose (1㎍/㎖ EtBr포함) Lane 1 : λDNA- Hind III 분해물 2 : 16 ℃, 10분 반응 3 : 16 ℃, 20분 반응 4 : 16 ℃, 30분 반응 5 : 16 ℃, 60분 반응

  
  평활 말단의 ligation 반응
  0.5 ㎍ /25 ㎕의 ColE1- Hae III digest를 T4 DNA Ligase 100 U를 첨가하여 16 ℃에서 10 ~ 60 분 반응시켰다.
  
  

  그림 2. ColE1- Hae III digest의 Agarose gel 전기영동 결과

  Lane 1 : ColE1- Hae III 분해물 (1㎍/㎖ EtBr포함) 2 : 16℃, 10분 반응 3 : 16℃, 20분 반응 4 : 16℃, 30분 반응 5 : 16℃, 60분 반응

제품설명

보존

농도

형태

첨부 buffer 조성 (10x)

활성의 정의

순도

활성 측정용 반응제 조성

사용상의 주의

용도

기원

일반적 성질

관련제품

T4 DNA Ligase와 E. coli DNA Ligase 특성 비교