TaKaRa
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Home > 전제품보기 > Cloning 관련 > 수식효소/DNA Polymerase、RNA Polymerase > Klenow Fragment (Large Fragment E. coli DNA Polymerase I)
Cloned

Klenow Fragment (Large Fragment E. coli DNA Polymerase I)

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
2140A
Klenow Fragment(Large Fragment E. coli DNA Polymerase I)
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200 U
68,800원 
86,000원
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Takara
2140B
Klenow Fragment(Large Fragment E. coli DNA Polymerase I)
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1,000 U
387,000원 
Takara
2140AK
Klenow Fragment(Large Fragment E. coli DNA Polymerase I)(2 U/μl)
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200 U
68,800원 
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2140AK_DS.v1901Da.pdf
Takara
2140BK
Klenow Fragment(Large Fragment E. coli DNA Polymerase I)(2 U/μl)
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1,000 U
387,000원 

농도
2~5 U/㎕(TaKaRa Code 2140A, 2140B)
2 U/㎕(TaKaRa Code 2140AK, 2140BK)
형상
(TaKaRa Code 2140A, 2140B)
50 mM Potassium Phosphate (pH6.5)
10 mM 2-Mercaptoethanol
50% Glycerol

(TaKaRa Code 2140AK, 2140BK)
50 mM Potassium Phosphate (pH6.5)
10 mM 2-Mercaptoethanol
50% Ethylene Glycol
보존 -20℃
첨부 Buffer 조성 (10×)
(TaKaRa Code 2140A, 2140B)
100 mM Tris-HCl (pH7.5)
70 mM MgCl2
1 mM DTT
주의)
TaKaRa Code 2140AK, 2140BK에는 반응용 버퍼가 첨부되어 있지 않습니다.
기원
Escherichia coli carrying the plasmid which encodes the gene of Klenow fragment
제품설명
본 효소는 주형, 프라이머(DNA, RNA 모두 가능) 존재하에서 dNTP를 기질로하여, 주형에 상보적인 DNA를 5’→ 3’방향으로 합성한다.
본 효소는 E. coli DNA Polymerase I에 DNA 공존하에서 subtilisin을 처리하면 5’→ 3’exonuclease 활성을 갖는 N-말단 유래 분자량 35,000의 소단편과, 5’→ 3’DNA polymerase 및 3’→ 5’exonuclease 활성을 갖는 C-말단 유래 분자량 68,000의 큰 fragment이 형성된다. 이 큰 fragment가 Klenow Fragment이다. TaKaRa의 Klenow Fragment는 대장균의 DNA polymerase I의 구조 유전자 pol A 개시 코돈으로부터 하류 약 1,000 bp을 결실한 단편을 대장균에 cloning하여 생산하고 있다. 따라서 3’→ 5’exonuclease 활성은 포함하나 5’→ 3’exonuclease 활성은 포함하지 않는다.
또한 TaKaRa Code 2140AK, 2140BK는 Kilo-Sequence용 Deletion Kit (TaKaRa Code 6030)용으로 농도를 조정한 것으로, 형상 조성의 일부를 클리세롤에서 에틸렌글리콕으로 바꾸어 sequence gel 전기영동 시 비틀어짐이 없이 깨끗한 전기영동을 얻을 수 있도록 한 것이다.
활성의 정의
Poly d(A-T) 합성 DNA를 주형/프라이머로 하여 37℃, pH7.4에서, 30분 동안 모든 10 nmol의 nucleotide를 산불용성 침전물로 바꾸는 효소활성을 1 U으로 한다.
활성 측정용 반응액 조성
67 mM Tris-HCl (pH7.4)
6.7 mM MgCl2
1 mM 2-Mercaptoethanol
20 μM 기질 DNA
33 μM dATP
33 μM [3H]dTTP
순도
- SDS전기영동에서 95% 이상의 순도를 나타낸다.
- 10 U의 본 효소와 1㎍의 closed circular (RFI)фX174 DNA를 37℃, 1시간 반응하여도 DNA의 전기영동 패턴에 변화가 일어나지 않는다.
사용상의 주의
- 희석에 의해서는 실활되지 않으나 심하게 교반하면 실활할 수 있다.
- 5’ → 3’Exonuclease 활성이 포함되어 있지 않으므로 nick translation 활성을 나타내지 않는다. 그러므로 이중가닥 DNA 말단과 gap의 수복에 적당하다.
- DNA polymerase I 과 같이 ddNTP를 저해없이 기질로 사용한다.
- T4 DNA polymerase에 비해, 주형 DNA의 고차구조에 대한 저항성이 높다(고차구조의 영향을 덜 받는다). - DNA에 대한 친화성이 강해 과량을 사용하면 aggregation이 생겨 반응이 저해받을 수 있다. - 5’말단의 수식에 사용하면, filling 후에 1염기를 여분으로 부가하는 경우가 있다.
용도
- Dideoxy법에 의한 염기서열 결정 (sequencing, Sanger법)이용도에는 특히 TaKaRa Code 2140AK, 2140BK가 적당하다. - 이중가닥 DNA말단의 평활화 - Oligonucleotide directed mutagenesis에 있어서 이중가닥 DNA의 합성 - Random 프라이머를 사용하여 DNA 표식

Keyword :
-
수식효소/DNA Polymerase、RNA Polymerase
Cloned
> DNA Polymerase I (E. coli )
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