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Cloned

E. coli DNA Ligase

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	2160A	E. coli DNA Ligase	1,000 U	80,800원 ~~101,000원~~	02.26 ~ 04.19
Takara	2160B	E. coli DNA Ligase	5,000 U (2160A x 5)	455,000원

Product index

제품설명

본 효소는 인접한 2중 가닥 DNA의 5'-P말단과 3'-OH말단을 phosphodiester 결합으로 연결하는 효소로 보조인자로서 NAD를 필요로 한다. 본 효소는 돌출말단(cohesive end)끼리의 연결반응만 가능하나, PEG와 고농도의 1가 양이온의 존재 하에서는 평활말단(blunt end)을 연결하는 반응도 가능하다. DNA의 5’-P 말단과 RNA의 3’-OH 말단, 그리고 RNA끼리의 연결은 불가능하다.

보존

-20 ℃

농도

60 U/㎕

형상

10 mM	Potassium Phosphate (pH7.5)
50 mM	KCl
1 mM	DTT
1 mM	EDTA
50%	Glycerol

주의

본 제품에는 reaction buffer가 포함되어 있지 않다.

활성의 정의

6 ㎍/20 ㎕의 λDNA-HindIII 분해물을 16℃, 30분 동안에 90%이상 ligation 시키는 효소 활성을 1 U로 한다.

활성 측정용 반응액 조성

30 mM	Tris-HCl (pH8.0)
4 mM	MgCl₂
10 mM	(NH₄)₂SO₄
1.2 mM	EDTA
100 μM	NAD
0.005%	BSA
6 ㎍/20 ㎕	λDNA-Hind III 분해물

순도

-360 U의 본 효소와 1 ㎍의 λDNA-HindIII 분해물을 37℃, 16시간 반응해도 DNA의 전기영동 패턴에는 변화가 일어나지 않는다.
-360 U의 본 효소와 1 ㎍의 closed circular (RF I) pBR322 DNA을 37℃, 16시간 반응해도 DNA의 전기영동 패턴에는 변화가 일어나지 않는다.
-360 U의 본 효소와 1 ㎍의 16S및 23S rRNA를 37℃, 1시간 반응해도 RNA의 전기영동 패턴에는 변화가 일어나지 않는다.

사용상의 주의

본 효소는 과발현 대장균주로부터 정제하여 불순물을 거의 포함하지 않는 고순도의 제품이다. 따라서 고농도이지만 과량을 사용해도 문제가 없다.

용도

Okayama-Berg법과 Gubler-Hoffman법으로 cDNA를 합성할 때 second strand cDNA 합성 (Okayama-Berg법에서의 사용량은 약 50 U, Gubler-Hoffman법에서의 사용량은 약 1.5 U)

기원

Escherichia coli UT 481 carrying the plasmid encoding the ligase

일반적 성질

-분자량, 약 77,000
-소단위, single polypeptide
-최적 pH
pH7.5~8.0(Tris-HCl완충 용액)
pH8.0(인산 완충액)
-보조인자, NAD
-활성화제
2가 양이온: Mg²⁺(1~3 mM), Mn 2⁺ (2~10 mM) 고농도에서는 저해
1가 양이온: NH⁴⁺, K+, Rb⁺, Cs⁺, Li⁺

T4 DNA Ligase와 E. coli DNA Ligase 특성 비교

	T4 DNA Ligase	E. coli DNA Ligase
분자량	약 62,000	약 77,000
최적 pH	7.2~7.8	7.5~8.0
조효소 (coenzyme)	ATP	NAD
환원제	필요	불필요
평활말단의 연결	가능	불가능 (+PEG로 가능)
돌출말단의 연결	가능	가능

Keyword :

수식효소／Ligase

Cloned

E. coli DNA Ligase

Cloning용 ligase

T4 DNA Ligase

T4 RNA Ligase

E. coli DNA Ligase

제품설명

보존

농도

형상

주의

활성의 정의

활성 측정용 반응액 조성

순도

사용상의 주의

용도

기원

일반적 성질

관련제품

T4 DNA Ligase와 E. coli DNA Ligase 특성 비교