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Exonuclease III

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
2170A
Exonuclease III
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5,000 U
70,000원  2170A_DS.v1901Da.pdf
Takara
2170B
Exonuclease III
관련학술 관심상품등록 구매하기
25,000 U
315,000원 

농도 100~300 U/㎕
형상
25 mM Tris-HCl (pH8.0)
50 mM KCl
0.5 mM DTT
50% Glycerol
보존 -20℃
(6개월 이상의 장기보존의 경우는 -80℃에서 동결보존)
첨부 Buffer 조성 (10×)
500 mM Tris-HCl (pH8.0)
50 mM MgCl2
100 mM 2-Mercaptoethanol
기원
Escherichia coli BE 257/pSGR 3 (B. Weiss박사로부터 공여)
제품설명
본 효소는 DNA의 phosphodiester 결합의 가수분해를 촉매함으로써 이중가닥 DNA의 3’- OH 말단으로 부터 5’-mononucleotide를 유리시키는 3’→5’exonuclease이다. DNA의 3’말단이 OH가 아닌 경우는 3’-phosphatase로서, apurinic acid, apyrimidic acid 부위에 대해서는 phosphodiester 결합을 절단하는 AP endonuclease로서 작용하고, RNase H의 활성도 갖는다.
본 효소는 dsDNA에 대한 특이성이 극히 높고, 평활말단, 3’-recessed end, 그리고 nicking site로부터 분해가 가능하지만, 3’-돌출말단은 분해하지 않는다(사용상의 주의 참조). 따라서, 다른 말단을 형성하는 제한효소로 2중 절단(double digestion)하므로써 한쪽 방향으로 부터의 분해가 가능하다.
최종 생성물은 이중가닥DNA의 상보 DNA와 5’- P mononucleotide 이다.
본 효소의 염기서열 특이성은 BAL31 nuclease에 비하여 낮지만, GC rich site에서 반응이 정지하는 빈도가 적기 때문에 DNA의 deletion 제작에 편리하다.
활성의 정의
제한효소 처리 송아지 흉선 DNA를 기질로 하여, 37℃, pH8.0에서 30분 동안 1 nmol의 산가용성 분해물을 생성하는 효소활성을 1 U으로 한다.
활성 측정용 반응액 조성
50 mM Tris-HCl (pH8.0)
5 mM MgCl2
10 mM 2-Mercaptoethanol
300 μM 기질 DNA
순도
- 5 U의 본 효소와 1 ㎍의 closed circular (RF I) фX174 DNA를 37℃, 1시간 반응하여도 DNA의 전기영동 패턴에 변화가 없다.
- 50 U의 본 효소와 1 ㎍의 pHSG298-Pst I 분해물을 37℃, 30분간 반응하여도 DNA의 전기영동 패턴에 변화가 없다.
사용상의 주의
- 효소의 성질상 DNA 말단이 3’돌출형이라도 그 말단의 형상과 서열에 따라서 기질로써 분해되는 경우가 있다.
분해되는 것이 확인된 제한효소 절단 말단의 예
  1. 염기 돌출형 (Eam1105 I 등)
  2. 염기 돌출형 (Pvu I, Sac II 등)
  3. 염기 돌출형 (Sfi I 등)
  4. 염기 돌출형 (Apa I 절단 말단은 분해되는 것이 확인되어 있다.
    또 Ban II, BstX I도 서열에 따라서는 분해될 가능성이 있다)
용도
- 이중가닥 DNA 단편 부분분해에 의한 DNA polymerase의 기질이 되는 일부
  단일가닥 DNA의 생성 (생성된 DNA는 dideoxy법에 의한 DNA의 염기서열 결정에 사용이 가능하다)
- 단일가닥 DNA 특이적 nuclease (S1 또는 Mung Bean Nuclease)와의 병용에 의한 DNA단편 결실 제작
  본 효소는 이중가닥 DNA에 고도의 특이성을 갖고 있으므로, 이중가닥 DNA 절단단편 (예를 들면 EcoR I-Pst I 단편)에 대해서는, 한쪽 (EcoR I 쪽)방향에서만의 결실을 제작할 수 있다.
- DNA - 단백질의 상호 작용의 해석






Keyword :
-
수식효소/Nuclease、Topoisomerase
> BAL 31 Nuclease
> DNA Topoisomerase I
Cloned
> Exonuclease I
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> Recombinant DNase I (RNase-free)
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> Ribonuclease H (RNase H)
> S1 Nuclease
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