• Subcloning 불필요 - Cloning 위치, insert 서열에 관계없이, 목적 vector에 바로 cloning
• 높은 효율 - 0.5~15 kb의 다양한 크기의 fragment에서 95% 이상의 정확도
• Seamless construction -불필요한 염기 추가 없이 cloning 완료 (e.g. 제한효소 사용 시, TA cloning 시)
• 다양한 application - Single insert cloning은 물론 multiple cloning, mutagenesis 등 적용 가능 (더 많은 적용 사례를 보시려면 클릭하세요)

제품설명

In-Fusion^® Snap Assembly는 단 15분 반응으로 선형화 vector에 어떤 insert라도 불필요한 염기 추가 없이 방향성 있는 cloning이 가능하다. Insert는 제한효소 처리나 phosphorylation, 혹은 blunt-end 처리 등 별도의 실험 과정이 필요하지 않다. In-Fusion^® Snap Assembly의 효율은 95% 이상으로, 충분한 수의 colony를 얻을 수 있어 대량 분석을 위한 scale up에도 적용할 수 있다.
In-Fusion^® Snap Assembly Master Mix는 ligase 없이도, insert와 선형화 vector 양 말단 15 bp의 상동 염기서열을 이용하여 효율적으로 정확하게 결합시킨다. 온라인에서 제공하는 In-Fusion^® primer design tool을 이용하면, 각각의 실험에 알맞은 primer를 쉽게 디자인할 수 있다. 반응이 시작되면, In-Fusion^® Master Mix는 선형화된 DNA 가닥의 3’ 말단으로부터 염기서열을 제거하고, 두 개의 DNA 단편에서 상보서열 간의 annealing을 통해 DNA를 결합시킨다. 이 방법은 subcloning이나 별도의 조작 없이, 여러 개의 fragment를 하나의 vector에 바로 적용할 수 있어 multiple cloning이 가능하다.
In-Fusion^® Snap Assembly Master Mix에는 master mix와 control vector, control insert가 포함되어 있어 cloning 효율을 같이 확인할 수 있기 때문에 실험의 신뢰성 또한 확인이 가능하다.
Stellar™ Competent Cells (Code 636763 외)은 In-Fusion^® 시스템에 최적화되어 있으며, In-Fusion^® Snap Assembly Master Mix with Competent Cells (Code 638951, 638952)에는 Stellar™ Competent Cells이 포함되어 있다.

그림 1. In-Fusion^® Workflow


그림 2. In-Fusion^® Snap Assembly와 In-Fusion HD (기존 제품) 간의 효율 비교. In-Fusion^® Snap Assembly는 기존 제품에 비해 정확도는 유지하면서, colony 형성 능력이 개선되었다.
제품 성능 비교를 위해 In-Fusion^® HD (기존 제품)과 In-Fusion^® Snap Assembly을 사용하여 서로 다른 크기의 inserts (405 bp-1,005 bp) 5개를 2.7 kb vector에 cloning하였다. Cloning 반응은 각각 세 번 반복 실험하였고, transformation 후 각 반응으로부터 생성된 colony를 각 20개 선택하여 sanger sequencing 한 결과, In-Fusion^® Snap Assembly에서 높은 정확도를 유지하면서 기존 제품보다 4배 더 많은 colony를 생성하였다. 두 실험에서 In-Fusion^® master mix를 제외한 primer와 시약 등은 동일하게 진행하였다.


그림 3. In-Fusion^® Snap Assembly와 NEBuilder HiFi (1). PCR로 선형화한 vector에 single insert를 cloning한 결과, insert 크기에 관계없이 NEBuilder HiFi보다 In-Fusion^® Snap Assembly에서 훨씬 많은 colony 수를 보였고, 95% 이상으로 높은 정확도를 보였다.
3.8 kb insert (A), 34.2 kb adenovirus insert (B)를 2.7 kb의 선형화 벡터에 cloning하였다. Cloning 반응은 각각 세 번 반복 실험하였고, transformation 후 각 반응으로부터 생성된 colony를 20개 선택하여 Sanger sequencing과 colony PCR 방법으로 cloning 정확도를 확인하였다. 그 결과, In-Fusion^® Snap Assembly가 NEBuilder HiFi에 비해 2배 더 많은 colony를 생성하였다.


그림 4. In-Fusion^® Snap Assembly와 NEBuilder HiFi (2). 제한효소로 선형화한 vector에 single insert를 cloning한 결과, 말단의 형태 (overhangs, blunt)에 관계없이 NEBuilder HiFi보다 In-Fusion^® Snap Assembly에서 훨씬 많은 colony 수를 보였다.
In-Fusion^® Snap Assembly와 타사 제품 (NEBuilder HiFi)를 이용해 제한효소를 처리하여 제작한 5’ overhang (A), blunt end (B), 3’ overhang (C)의 단일 insert (3.8 kb)를 선형화한 표준 vector에 cloning하였다. Cloning 반응은 각각 세 번 반복 실험하였고, 각각 생성된 colony를 20개 선택하여 Sanger sequencing으로 서열이 정확하게 삽입되었는지 확인하였다.

Applications

그림 5. In-Fusion^® Snap Assembly Master Mix의 다양한 applications 예시

자세한 구성은 CoA를 참고하세요.

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Citations