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Cloned

T4 Polynucleotide Kinase

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)		 비고 사용자매뉴얼
Takara
 2021A
 T4 Polynucleotide Kinase
관련학술 구매하기 		1,000 U
 89,000원  2021A_DS.v2106Da.pdf
Takara
 2021B
 T4 Polynucleotide Kinase
관련학술 구매하기 		5,000 U
 400,500원 

제품설명
본 효소는 DNA 혹은 RNA 5’-말단의 ATP γ위치에 인산기를 첨가하는 효소이다. ATP가 존재할 때 5’-OH 말단의 인산화 반응이 일어난다. 이때 표식 된 ATP를 첨가하면 인산화 전이반응이 동시에 일어나 5’-말단이 표식 된 인산기로 교환된다 (교환반응).
보존 -20℃
농도 10 U/㎕
형상

50 mM

 

Tris-HCl (pH7.5)

50 mM

 

KCl

1 mM

 

DTT

0.1 μM

 

ATP

50%

 

Glycerol
첨부 buffer 구성 (10x)

500 mM

 

Tris-HCl (pH8.0)

100 mM

 

MgCl 2

50 mM

 

DTT
표식하지 않고 인산화 반응을 실시할 때는 반응액에 최종 농도 1 mM로 ATP를 첨가하여 주십시오.
본 효소에는 ATP가 첨부되어 있지 않습니다 (ATP (Code 4041) 이용 가능).
활성의 정의
Micrococcal nuclease에서 활성화한 송아지 흉선 DNA을 기질로 하여, 37℃, pH7.6에서 30 분간 1 nmol의 [γ- 32P]ATP를 산불용성 침전물로 바꾸는 효소활성을 1U으로 한다.
활성 측정용 반응액 조성

50 mM

 

Tris-HCl (pH7.6)

10 mM

 

MgCl2

1 mM

 

DTT

100 μM

 

[γ- 32P]ATP

0.2 ㎎/㎖

 

5’-OH DNA
용도
- DNA 또는 RNA의 5’-말단 표식
- 합성 DNA linker의 5’-말단 인산화
기원
Escherichia coli carrying the plasmid encoding T4 pse T gene
일반적 성질
- 분자량: 약 140,000
- Subunit
   분자량 약 33,000의 subunit homo oligomer
   활성 발현 시에는 tetramer로 추정
- 최적 pH
   인산화 반응: pH6.5 ~ pH8.5
   교환 반응: pH6.2 ~ pH6.6
   탈 인산화 반응: pH6.0
- 보조인자
   Mg2+(10 mM, pH7.6)를 필요로 함, 그 외에 Mn2+, Zn2+ 도 사용 가능
   환원제 필요성
  • 5 mM DTT에서 최대 활성을 나타낸다.
  • 10 mM 2-mercaptoethanol 또는 10 mM glutathione으로 대체할 수 있지만
    각각 5 mM DTT 대비 활성이 80%, 70% 저하된다.
- 저해제
   인산, pyrophosphoric acid, trisodium phosphate: 7 mM, 50% 억제
   황산암모늄: 7 mM 75%억제

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