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Cloned

T4 Polynucleotide Kinase

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	2021A	T4 Polynucleotide Kinase	1,000 U	89,000원
Takara	2021B	T4 Polynucleotide Kinase	5,000 U	400,500원

Product index

제품설명

본 효소는 DNA 혹은 RNA 5’-말단의 ATP γ위치에 인산기를 첨가하는 효소이다. ATP가 존재할 때 5’-OH 말단의 인산화 반응이 일어난다. 이때 표식 된 ATP를 첨가하면 인산화 전이반응이 동시에 일어나 5’-말단이 표식 된 인산기로 교환된다 (교환반응).

보존 -20℃

농도 10 U/㎕

형상

50 mM		Tris-HCl (pH7.5)
50 mM		KCl
1 mM		DTT
0.1 μM		ATP
50%		Glycerol

첨부 buffer 구성 (10x)

500 mM		Tris-HCl (pH8.0)
100 mM		MgCl ₂
50 mM		DTT

표식하지 않고 인산화 반응을 실시할 때는 반응액에 최종 농도 1 mM로 ATP를 첨가하여 주십시오.
본 효소에는 ATP가 첨부되어 있지 않습니다 (ATP (Code 4041) 이용 가능).

활성의 정의

Micrococcal nuclease에서 활성화한 송아지 흉선 DNA을 기질로 하여, 37℃, pH7.6에서 30 분간 1 nmol의 [γ- ³²P]ATP를 산불용성 침전물로 바꾸는 효소활성을 1U으로 한다.

활성 측정용 반응액 조성

50 mM		Tris-HCl (pH7.6)
10 mM		MgCl₂
1 mM		DTT
100 μM		[γ- ³²P]ATP
0.2 ㎎/㎖		5’-OH DNA

용도

- DNA 또는 RNA의 5’-말단 표식
- 합성 DNA linker의 5’-말단 인산화

기원

Escherichia coli carrying the plasmid encoding T4 pse T gene

일반적 성질

- 분자량: 약 140,000
- Subunit
   분자량 약 33,000의 subunit homo oligomer
   활성 발현 시에는 tetramer로 추정
- 최적 pH
   인산화 반응: pH6.5 ~ pH8.5
   교환 반응: pH6.2 ~ pH6.6
   탈 인산화 반응: pH6.0
- 보조인자
   Mg²⁺(10 mM, pH7.6)를 필요로 함, 그 외에 Mn²⁺, Zn²⁺ 도 사용 가능
   환원제 필요성

5 mM DTT에서 최대 활성을 나타낸다.
10 mM 2-mercaptoethanol 또는 10 mM glutathione으로 대체할 수 있지만
각각 5 mM DTT 대비 활성이 80%, 70% 저하된다.

- 저해제
인산, pyrophosphoric acid, trisodium phosphate: 7 mM, 50% 억제
황산암모늄: 7 mM 75%억제

Keyword :

수식효소／Alkaline Phosphatase、Polynucleotide Kinase

탈인산화효소

Alkaline Phosphatase (Calf intestine) (CIAP)

Alkaline Phosphatase (E. coli C75) (BAP)

Alkaline Phosphatase (Shrimp) (SAP)

Cloned

T4 Polynucleotide Kinase