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고효율의 Ligation premix 와 T-vector의 조합

Mighty TA-cloning Kit

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
6028
Mighty TA-cloning Kit
관련학술 구매하기
20 회
167,000원  6028_e.v1812Da.pdf

제품설명
본 제품은 Taq 기반의 DNA polymerase로 PRC한 산물의 TA-cloning을 위한 제품이다. 고효율 ligation premix인 DNA Ligation Kit <Mighty Mix> (Code: 6023)와 pUC 계열의 pMD20-T vector를 포함하고 있어 빠르고 간편하게 ligation할 수 있다.
*TA cloning: Taq DNA polymerase의 PCR 산물은 그 3’ 말단에 deoxyriboadenosine (dA) 한 염기가 추가된다. 이 PCR 증폭산물은 3’ 말단에 deoxyribothymidine (dT) 한개가 추가된 T vector가 PCR 증폭산물의 dA 염기와 상보적으로 결합하는 것을 이용해 cloning할 수 있다.

[주의] PrimeSTAR® 시리즈의 PCR 산물은 대부분 평활 말단 (blunt end)이 되기 때문에 말단에 dA 염기를 1개부가하는 과정을 별도로 진행해야만 이 제품을 사용할 수 있다. 따라서 이 과정의 시약을 포함한 Mighty TA-cloning Reagent Set for PrimeSTAR® (Code 6019)를 추천한다.
내용 (20 회)

pMD20-T vector (50 ng/㎕)

20 ㎕

Ligation Mighty Mix *1

2 X 50 ㎕

Positive Control Insert *2

10 ㎕

*1DNA Ligation Kit <Mighty Mix>(Code 6023)에 포함된 시약과 동일
*2 3’ 말단에 dA overhang을 가지는 약 200 bp의 DNA fragment
(E.coli gDNA를 주형으로 TaKaRa Ex Taq®에서 증폭, 10 ng/㎕)
보존 -20℃
사용상의 주의
1. Ligation Mighty Mix는 얼음에서 천천히 녹인 뒤 사용전 가볍게 섞어준다.
2. Transformation 후에도 cloning한 insert에 길이나 방향에 따라 LB + Amp/X-Gal/IPTG plates에서 파란색 colony가 형성될 수 있다. 이 경우 colony PCR을 통해 insert DNA의 여부를 확인한다.
3. Agarose gel에서 목적 PCR 산물을 회수하는 경우 UV에 오래 조사되면 DNA가 손상되어 cloning 효율이 낮아질 수 있다.
4. PCR template으로 clone vector와 동일한 selection marker (pMD20-T vector의 경우 Ampr)를 가진 plasmid를 사용하는 경우, template plasmid가 E.coli에 transformation 되는 것을 방지하기 위해 전기영동 후 agarose gel에서 회수 및 정제한다.
pMD20-T vector
관련제품
- PrimeSTAR® 등 High fidelity 효소를 증폭산물의 TA-cloning Mighty TA-cloning Reagent Set for PrimeSTAR® (Code 6019)
- 효율 높은 TA-cloning을 위한 T-vector T-Vector pMD20 (Code 3270)
참고자료
- Cloning 실험 입문자를 위한 ‘Step by Step Cloning 가이드’
- 실험 목적별로 추천하는 Cloning Kit

Keyword : T4 DNA ligase,T vector,TA cloning,TA-cloning,t cloining,t-cloning,cloning,라이게이즈,클로닝,t easy

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