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Mung Bean Nuclease

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)		 비고 사용자매뉴얼
Takara
 2420A
 Mung Bean Nuclease
관련학술 구매하기 		2,000 U
 96,000원  2420Ａ_DS.v2107Da.pdf
Takara
 2420B
 Mung Bean Nuclease
관련학술 구매하기 		10,000 U
 432,000원 

제품설명
본 효소는 endonuclease로 DNA, RNA 모두에서 단일 가닥 부분 만 특이적으로 절단하며, 5’-phosphate end를 가지는 mono- 또는 oligonucleotide를 생성한다. 과량의 효소를 사용하면 이중 가닥 DNA, RNA 또는 DNA/RNA hybrid를 절단하며, 이 경우 AT-rich 부분을 선택적으로 분해한다. ApN, TpN 서열을 잘 절단하는 경향이 있으며 특히 ApA 서열을 100% 분해하지만 G 및 C 서열은 거의 분해하지 않는다.
보존 -20℃
농도 40 U/㎕
형상

10 mM

 

Tris-HCl (pH7.5)

0.1 mM

 

Zinc acetate

50%

 

Glycerol
첨부 buffer 조성 (10x)

300 mM

 

Sodium acetate (pH5.0)

1,000 mM

 

NaCl

10 mM

 

Zinc acetate

50%

 

Glyerol
활성의 정의
37℃, pH5.0에서 열변성 송아지 흉선 DNA를 기질로 1분에 1 ㎍의 산성인 가용성 분해물을(acid-soluble form) 생성하는 효소 활성을 1 U으로 한다.
활성 측정용 반응액 조성

30 mM

 

Sodium acetate (pH5.0)

100 mM

 

NaCl

1 mM

 

Zinc acetate

10%

 

Glycerol

0.5 ㎎/㎖

 

열변성 송아지 흉선 DNA

사용상의 주의
- 본 효소는 pH5.0에서 0.1 mM의 Zn2+, 1 mM cystein, 0.005% TritonX-100이 없는 경우 서서히 활성을 잃지만, pH7.0에서는 첨가물 없이도 안정적이다. 또한 pH가 낮은 경우 단일 가닥에 대한 특이성이 낮아진다.
- 본 효소는 EDTA의 존재 하에서 열처리 또는 0.01%의 SDS에 의해 완전히 불활성화 된다.
- 본 효소의 이중 가닥 식별 능력은 염기 서열에 의존하고 있기 때문에 A↓pN 그리고 T(U)↓pN에서 절단하는 경향이 있다. 특히 A↓pA 서열은 완전히 분해하지만 G 및 C 서열은 거의 분해하지 않는다.
- 본 효소는 S1 Nuclease와 달리 nick의 반대 방향 사슬을 절단할 수 없다.
용도
- 2중가닥 DNA의 끝부분의 평활화 (단, 효율은 염기 배열에 따라 달라진다.)
- Hybridization mapping (S1 mapping), 특히 본 효소는 S1 Nuclease 보다 nibbling이 적게 일어나기 때문에, 정확한 밴드를 얻을 수 있다.
- cDNA hairpin loop cleavage
- Formamide가 존재할 때 유전자의 coding region 절단
기원
Mung bean sprouts
일반적 성질
- 분자량: 39,000의 당단백질
- Subunit: 25,000과 15,000의 heterodimer
- 최적 pH
pH5.0 (50 mM CH3COONa buffer), pH8.0에서는 pH5.0의 0.01%의 활성
pH5.0에서 0.1 mM의 Zn2+, 1mM cystein, 0.005% TritonX-100이 없는 경우 서서히 활성을 잃지만, pH7.0에서는 첨가물 없이도 안정적이다.
또한 pH가 낮은 경우 단일 가닥에 대한 특이성이 낮아진다.
- 보조인자: Zn2+를 필요로 한다.
- 저해제
EDTA에서 비가역적으로 불활성화
0.01% SDS (pH5.0)에서 완전 불활성화

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