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DNA Topoisomerase I

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	2240A	DNA Topoisomerase I	100 U	84,800원 ~~106,000원~~	03.02 ~ 04.30
Takara	2240B	DNA Topoisomerase I	500 U	477,000원

Product index

농도 5~20 U/㎕

형상

20 mM	Potassium Phosphate (pH7.2)
50 mM	KCl
0.05 mM	EDTA
5 mM	2- Mercaptoethanol
0.02%	BSA
50%	Glycerol

보존 -20℃

첨부 Buffer 조성(10×)

350 mM	Tris-HCl (pH8.0)
720 mM	KCl
50 mM	MgCl₂
50 mM	DTT
50 mM	Spermidine
0.1%	BSA(별첨)

기원

Calf thymus

제품설명

본 효소는 그림 1에 나타낸 4종류의 반응을 촉매하는 효소이다. 송아지 흉선 유래이므로 원핵 생물 유래효소와 성질이 달라, Mg2＋가 존재하지 않아도 활성을 나타낸다. 또 원핵 생물의 DNA Topoisomerase I이 (-)의 supercoil 분자에만 작용하는데 반해 본 효소는 (+), (-)의 supercoil 분자를 풀수 있다(그림 1).

그림 DNA Topoisomerase I이 촉매하는 반응
1. DNA의 supercoil 상태를 이완
2. ssDNA 분자 내에 DNA 가닥의 매듭을 만들거나(knotting), 역형태로의 반응 (unknotting)
3. 상보적인 염기서열을 갖는 ssDNA로부터 ds closed circular DNA 분자를 형성하는 반응
4. 두 ds circular DNA 분자의 어느 한쪽에 nick이 존재할 경우 두 분자의 연결반응
(catenation) 또는 역의 반응(decatenation)을 촉매

활성의 정의

0.5 ㎍/50 ㎕의 supercoiled pBR322 DNA를 37℃에서 30분 동안 100% relaxed form으로 전환시키는 효소활성을 1 U으로 한다.

활성 측정용 반응액 조성

35 mM	Tris-HCl(pH8.0)
72 mM	KCl
5 mM	MgCl₂
5 mM	DTT
5 mM	Spermidine
0.01%	BSA
0.5 ㎍/50 ㎕	Supercoiled pBR322 DNA

순도

24 U의 본 효소와 0.5 ㎍의 supercoiled pBR322 DNA를 37℃, 24시간 반응하여도 DNA의 EtBr 존재하에서 전기영동 패턴에 변화가 일어나지 않는다.

용도

- DNA conformation의 변환과 해석

사용상의 주의

- 첨부반응액에는 spermidine (최종농도 5 mM)이 첨가되어 있다. Spermidine을 첨가하지 않는 경우 활성이 1/20정도로 저하하는 수가 있다. Spermidine 을 첨가할 때는 HCI로 pH8.0로 조정하여 사용할 것.
- pBR322 DNA와 фX174 DNA의 RF I (supercoil 분자)을 DNA Topoisomerase I으로 반응한 후, 전기영동하면 gel중에 EtBr이 포함되어 있는 경우 밴드의 위치에 변화가 일어나지 않는다.
이것은 DNA Topoisomerase I에 의해 relaxed form으로 변환한 DNA가 EtBr의 영향으로 다시 supercoil 상태로 변해버리기 때문이다.
따라서 DNA Topoisomerase I활성을 측정할 때는 EtBr이 포함되지 않은 아가로스 겔에서 전기영동을 실시한 다음 EtBr로 염색할 필요가 있다.
- 10× 첨부 버퍼에 0.1% BSA를 직접 첨가하면 다량의 백색 침전이 생기므로 반응액을 조제할 때는 다음의 순서로 한다.
dH₂O → 10× 첨부 버퍼 → 0.1% BSA → 기질 DNA
- 본 효소는 유리나 플라스틱에 대하여 흡착성이 크므로 반응할 때는 BSA(Bovine Serum Albumin)을 첨가하는 것이 바람직하다.

Keyword :

수식효소／Nuclease、Topoisomerase

BAL 31 Nuclease

DNA Topoisomerase I

Cloned

Exonuclease I

Cloned

Exonuclease III

Micrococcal Nuclease

Mung Bean Nuclease

RT-PCR 필수품

Recombinant DNase I (RNase-free)

Cloned

Ribonuclease H (RNase H)

S1 Nuclease