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Cloned

Exonuclease III

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	2170A	Exonuclease III	5,000 U	56,000원 ~~70,000원~~	03.02 ~ 04.30
Takara	2170B	Exonuclease III	25,000 U	315,000원

Product index

농도 100~300 U/㎕

형상

25 mM	Tris-HCl (pH8.0)
50 mM	KCl
0.5 mM	DTT
50%	Glycerol

보존 -20℃

(6개월 이상의 장기보존의 경우는 -80℃에서 동결보존)

첨부 Buffer 조성 (10×)

500 mM	Tris-HCl (pH8.0)
50 mM	MgCl₂
100 mM	2-Mercaptoethanol

기원

Escherichia coli BE 257/pSGR 3 (B. Weiss박사로부터 공여)

제품설명

본 효소는 DNA의 phosphodiester 결합의 가수분해를 촉매함으로써 이중가닥 DNA의 3’- OH 말단으로 부터 5’-mononucleotide를 유리시키는 3’→5’exonuclease이다. DNA의 3’말단이 OH가 아닌 경우는 3’-phosphatase로서, apurinic acid, apyrimidic acid 부위에 대해서는 phosphodiester 결합을 절단하는 AP endonuclease로서 작용하고, RNase H의 활성도 갖는다.
본 효소는 dsDNA에 대한 특이성이 극히 높고, 평활말단, 3’-recessed end, 그리고 nicking site로부터 분해가 가능하지만, 3’-돌출말단은 분해하지 않는다(사용상의 주의 참조). 따라서, 다른 말단을 형성하는 제한효소로 2중 절단(double digestion)하므로써 한쪽 방향으로 부터의 분해가 가능하다.
최종 생성물은 이중가닥DNA의 상보 DNA와 5’- P mononucleotide 이다.
본 효소의 염기서열 특이성은 BAL31 nuclease에 비하여 낮지만, GC rich site에서 반응이 정지하는 빈도가 적기 때문에 DNA의 deletion 제작에 편리하다.

활성의 정의

제한효소 처리 송아지 흉선 DNA를 기질로 하여, 37℃, pH8.0에서 30분 동안 1 nmol의 산가용성 분해물을 생성하는 효소활성을 1 U으로 한다.

활성 측정용 반응액 조성

50 mM	Tris-HCl (pH8.0)
5 mM	MgCl₂
10 mM	2-Mercaptoethanol
300 μM	기질 DNA

순도

- 5 U의 본 효소와 1 ㎍의 closed circular (RF I) фX174 DNA를 37℃, 1시간 반응하여도 DNA의 전기영동 패턴에 변화가 없다.
- 50 U의 본 효소와 1 ㎍의 pHSG298-Pst I 분해물을 37℃, 30분간 반응하여도 DNA의 전기영동 패턴에 변화가 없다.

사용상의 주의

- 효소의 성질상 DNA 말단이 3’돌출형이라도 그 말단의 형상과 서열에 따라서 기질로써 분해되는 경우가 있다.
분해되는 것이 확인된 제한효소 절단 말단의 예
  1. 염기 돌출형 (Eam1105 I 등)
  2. 염기 돌출형 (Pvu I, Sac II 등)
  3. 염기 돌출형 (Sfi I 등)
  4. 염기 돌출형 (Apa I 절단 말단은 분해되는 것이 확인되어 있다.
    또 Ban II, BstX I도 서열에 따라서는 분해될 가능성이 있다)

용도

- 이중가닥 DNA 단편 부분분해에 의한 DNA polymerase의 기질이 되는 일부
단일가닥 DNA의 생성 (생성된 DNA는 dideoxy법에 의한 DNA의 염기서열 결정에 사용이 가능하다)
- 단일가닥 DNA 특이적 nuclease (S1 또는 Mung Bean Nuclease)와의 병용에 의한 DNA단편 결실 제작
본 효소는 이중가닥 DNA에 고도의 특이성을 갖고 있으므로, 이중가닥 DNA 절단단편 (예를 들면 EcoR I-Pst I 단편)에 대해서는, 한쪽 (EcoR I 쪽)방향에서만의 결실을 제작할 수 있다.
- DNA - 단백질의 상호 작용의 해석

Keyword :

수식효소／Nuclease、Topoisomerase

BAL 31 Nuclease

DNA Topoisomerase I

Cloned

Exonuclease I

Cloned

Exonuclease III

Micrococcal Nuclease

Mung Bean Nuclease

RT-PCR 필수품

Recombinant DNase I (RNase-free)

Cloned

Ribonuclease H (RNase H)

S1 Nuclease