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Cloned

E. coli DNA Ligase

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
2160A
E. coli DNA Ligase
관련학술 구매하기
1,000 U
96,000원  2160A_DSv2107Da.pdf
Takara
2160B
E. coli DNA Ligase
관련학술 구매하기
5,000 U
432,000원 

제품설명
본 효소는 인접한 2중 가닥 DNA의 5'-P말단과 3'-OH말단을 phosphodiester 결합으로 연결하는 효소로 보조인자로서 NAD를 필요로 한다. 본 효소는 돌출말단(cohesive end)끼리의 연결반응만 가능하나, PEG와 고농도의 1가 양이온의 존재 하에서는 평활말단(blunt end)을 연결하는 반응도 가능하다. DNA의 5’-P 말단과 RNA의 3’-OH 말단, 그리고 RNA끼리의 연결은 불가능하다.
보존
-20 ℃
농도
60 U/㎕
형상

10 mM

Potassium Phosphate (pH7.5)

50 mM

KCl

1 mM

DTT

1 mM

EDTA

50%

Glycerol

주의
본 제품에는 reaction buffer가 포함되어 있지 않다.
활성의 정의
6 ㎍/20 ㎕의 λDNA-HindIII 분해물을 16℃, 30분 동안에 90%이상 ligation 시키는 효소 활성을 1 U로 한다.
활성 측정용 반응액 조성

30 mM

Tris-HCl (pH8.0)

4 mM

MgCl2

10 mM

(NH4)2SO4

1.2 mM

EDTA

100 μM

NAD

0.005%

BSA

6 ㎍/20 ㎕

λDNA-Hind III 분해물

순도
-360 U의 본 효소와 1 ㎍의 λDNA-HindIII 분해물을 37℃, 16시간 반응해도 DNA의 전기영동 패턴에는 변화가 일어나지 않는다.
-360 U의 본 효소와 1 ㎍의 closed circular (RF I) pBR322 DNA을 37℃, 16시간 반응해도 DNA의 전기영동 패턴에는 변화가 일어나지 않는다.
-360 U의 본 효소와 1 ㎍의 16S및 23S rRNA를 37℃, 1시간 반응해도 RNA의 전기영동 패턴에는 변화가 일어나지 않는다.
사용상의 주의
본 효소는 과발현 대장균주로부터 정제하여 불순물을 거의 포함하지 않는 고순도의 제품이다. 따라서 고농도이지만 과량을 사용해도 문제가 없다.
용도
Okayama-Berg법과 Gubler-Hoffman법으로 cDNA를 합성할 때 second strand cDNA 합성 (Okayama-Berg법에서의 사용량은 약 50 U, Gubler-Hoffman법에서의 사용량은 약 1.5 U)
기원
Escherichia coli UT 481 carrying the plasmid encoding the ligase
일반적 성질
-분자량, 약 77,000
-소단위, single polypeptide
-최적 pH
pH7.5~8.0(Tris-HCl완충 용액)
pH8.0(인산 완충액)
-보조인자, NAD
-활성화제
2가 양이온: Mg2+(1~3 mM), Mn 2+ (2~10 mM) 고농도에서는 저해
1가 양이온: NH4+, K+, Rb+, Cs+, Li+
관련제품
T4 DNA Ligase와 E. coli DNA Ligase 특성 비교

 

T4 DNA Ligase

E. coli DNA Ligase

분자량

약 62,000

약 77,000

최적 pH

7.2~7.8

7.5~8.0

조효소 (coenzyme)

ATP

NAD

환원제

필요

불필요

평활말단의 연결

가능

불가능 (+PEG로 가능)

돌출말단의 연결

가능

가능


Keyword :

수식효소/Ligase
>
Cloning용 ligase
T4 DNA Ligase