닫기
TaKaRa
로그인  |   회원가입  |   ID/PW 찾기   |  제품상담문의  
제품명/제품코드
키워드검색
검색
닫기
  • 고객지원센터 
  • 업무안내│학술지원
  • 전화번호│02-2081-2510
  • Email     │support@takara.co.kr
  • 대전지사 
  • 업무안내│대전/충청지역 주문, 학술지원
  • 전화번호│042-828-6525
  • Email     │tkbd@takara.co.kr
  • 업무시간안내
  • [ 평  일 ] 09 : 00 ~ 18 : 00 │ [ 점심시간 ] 12 : 00 ~ 13 : 00
  • 토·일요일, 공휴일은 휴무입니다.
Cloning용 ligase

T4 DNA Ligase

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
2011A
T4 DNA Ligase
관련학술 구매하기
25,000 U
62,000원  2011A_DS.v2106Da.pdf
Takara
2011B
T4 DNA Ligase
관련학술 구매하기
125,000 U
279,000원 

  • T4 DNA Ligase의 일반적인 사용 예
  • T4 DNA Ligase를 사용한 DNA 단편의 ligation 반응 결과의 예
제품설명
본 효소는 인접한 DNA의 5'-P말단과 3'-OH말단을 phosphodiester 결합으로 연결하는 효소이다. 보조인자로 ATP를 필요로 하고, 반응 중간산물로 enzyme-ATP complex가 만들어져 이것이 DNA에 작용한다. 본 효소는 돌출말단 (cohesive end), 평활말단 (blunt end)을 연결하는 활성을 가진다. 또한 극히 낮지만 DNA와 RNA, RNA끼리도 연결하는 활성을 가지고 있다.
보존
-20℃
농도
350 U/㎕
형태

10 mM

Tris-HCl (pH7.5)

50 mM

KCl

1 mM

DTT

0.1 mM

EDTA

50%

Glycerol

첨부 buffer 조성 (10x)

660 mM

Tris-HCl (pH7.6)

66 mM

MgCl2

100 mM

DTT

1 mM

ATP

활성의 정의
6 ㎍/20 ㎕의 λDNA-HindIII 분해물을 16℃에서 약 30분동안 90% 이상 ligation 시키는 효소 활성을 1 U로 한다.
본 효소의 1 U는 ATP-PPi교환 반응의 0.008 Weiss Unit에 해당한다.
[Weiss Unit 측정용 반응액 조성]

66 mM

Tris-HCl (pH7.6)

6.6 mM

MgCl2

10 mM

DTT

66 μM

ATP

3.3 μM

[ 32P] Na 4P 2O 7

순도
-2000 U의 본 효소와 1 ㎍의 λDNA-HindIII 분해물을 37℃, 16시간 반응하여도 전기영동 패턴에는 변화가 일어나지 않는다.
-2000 U의 본 효소와 1 ㎍의 supercoiled pBR322 DNA를 37℃, 16시간 반응하여도 전기영동 패턴에는 변화가 일어나지 않는다.
-2000 U의 본 효소와 1 ㎍의 16S, 23S rRNA를 37℃, 16시간 반응하여도 전기영동 패턴에는 변화가 일어나지 않는다.
활성 측정용 반응제 조성

66 mM

Tris-HCl 완충용액 (pH7.6)

6.6 mM

MgCl2

10 mM

DTT

0.1 mM

ATP

6 ㎍/20 ㎕

λDNA-HindIII 분해물

사용상의 주의
Ligation 반응은 말단 염기서열의 종류에 따라 반응 속도가 다르다. 일반적으로 다음과 같은 경향이 있다.
  • 돌출말단(cohesive end) ligation
    HindIII> Pst I> EcoRI> BamH I> Sal I
    (Hind III site는 Sal I site보다 10~40배 빠르게 Ligation한다)
  • 평활말단(blunt end) ligation
    Hae III> Alu I> Hinc II> Sma I
    (Hae III site는 Sma I site보다 5~10배 빠르게 Ligation한다)
    EcoR V> Sca I>Pvu II> Nru I
용도
-Insert와 DNA와 vector DNA와의 연결
-DNA 단편 간의 연결 또는 어댑터 DNA와의 연결
기원
Escherichia coli carrying the plasmid that encodes the gene of T4 DNA ligase
일반적 성질
- 분자량: 약 62,000
- 소단위: single polypeptide
- 최적 pH: pH7.6 (pH7.2~pH7.8, Tris-HCl)
(pH6.9로 46%, pH8.0에서 65%에 활성 저하)
- 보조 인자: ATP
- 활성화제
2가 양이온: Mg2+ (최적농도: 10mM)
환원제: DTT, 2-mercaptoethanol
(2-mercaptoethanol이 더 효과가 크다.)
- 저해제
dATP (길항 저해제)
고농도 일가 양이온: 200 mM Na+, 200 mM K+
(10% 폴리에틸렌글리콜 (PEG)이 존재할 때는 반대로 활성화 작용을 보인다.)
다당류: heparin, carrageenan
관련제품
- 실험목적별로 선택하는 Cloning Kit 선택가이드 - 링크
- DNA Ligation Kit 〈Mighty Mix〉 (Code 6023)
- Mighty TA-cloning Kit (Code 6028)
- Mighty TA-cloning Reagent Set for PrimeSTAR® (Code 6019)
T4 DNA Ligase와 E. coli DNA Ligase 특성 비교

 

T4 DNA Ligase

E. coli DNA Ligase

분자량

약 62,000

약 77,000

최적 pH

7.2~7.8

7.5~8.0

조효소 (coenzyme)

ATP

NAD

환원제

필요

불필요

평활말단의 연결

가능

불가능 (+PEG로 가능)

돌출말단의 연결

가능

가능


Keyword :

수식효소/Ligase
>
Cloning용 ligase
T4 DNA Ligase