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Cloning 관련
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Vector (Cloning 용)
> pUC118/119 type vector
pUC118/119 type vector
제조사
제품코드
제품명
용량
가격
(부가세별도)
비고
사용자매뉴얼
Takara
3318
pUC118 DNA
25 μg
(0.5 OD)
87,000원
Takara
3319
pUC119 DNA
25 μg
(0.5 OD)
105,000원
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5 μg
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105,000원
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3324
pUC118 Hind III/BAP
5 μg
(0.1 OD)
105,000원
Takara
3328
pTV118N DNA
25 μg
(0.5 OD)
105,000원
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농도
pUC118, pUC119, pTV118N :
250~1,000 ㎍/㎖
pUC118 BAP처리 DNA :
50~250 ㎍/㎖
보존 -20℃
GenBank
Entry Name
Accession No.
pUC118
U07649
U07649
pUC119
U07650
U07650
주) Gen Bank에 등록되어 있는 pUC118 의 서열은 2540번이 C이지만, 당사에서 판매하는 pUC118 벡터는 2540번이 T이다. 또한 GenBank에 등록된 pUC119의 서열은 597번, 852번, 901번 및 2540번이 C이지만, 당사에서 판매하는 벡터는 이들 자리가 모두 T 이다.
DNA 길이(Messing의 구축법으로 계산)
pUC118/pUC119 :
3,162 bp
pTV118N :
3,163 bp
제품설명
pUC118/pUC119 vector는 pUC18/pUC19 내에 M13 phage DNA의 intergenic region (IG)을 삽입한 plasmid이다. Helper phage M13KO7의 감염에 의해 pUC118/pUC119는 ssDNA가 되어 우선적으로 phage 입자 내에 packaging되어 균체 밖으로 방출된다. 이 시스템을 사용하여 커다란 DNA 단편도 deletion 없이 안정하게 ssDNA를 얻을 수 있다.
또한, pUC118은 pUC18과, pUC119는 pUC19와 각각 동일한 cloning site를 가지고 있어 IPTG와 X-Gal을 포함하는 플레이트에서 외래 DNA의 도입 유무를 용이하게 판별할 수 있다. 제한효소 절단 및 BAP 처리한 pUC118은 multi-cloning site의 한 곳만을 절단하고 비교적 사용빈도가 높은 제한효소를 사용하여 pUC118을 절단한 후 대장균 유래의 Alkaline Phosphatase (BAP)로 탈인산화한 클로닝 벡터이다. 벡터 만의 self-ligation을 방지하여 형질전환 세포의 blank 수치를 낮출 수 있다.
pTV118N은 외래 유전자를 직접 발현할 수 있도록 pUC118를 변형시킨 ssDNA 제조용phagemid vector이다.
lac
Zα의 개시codon (ATG) 위치에
Nco
I 절단서열 (CCATGG)이 도입되어 있다. 이
Nco
I 부위에 외래 유전자를 삽입하여 번역 frame을 맞추면
lac
promoter,
lac
Z의 SD서열과 그 개시 코돈을 사용하여 외래 유전자를 유도 발현할 수 있다. SD서열과 개시 코돈간의 염기수는 번역 개시 효율이 높다고 보고된 8염기로 설계되어 있으며, 번역 frame을 맞추어 외래 유전자를 클로닝하기 위하여 3 종류의
Nco
I linker를 별도 판매하고 있다.
또한, helper phage를 이용하여 ss DNA를 회수하여 RV-N primer로 염기서열을 결정할 수 있으므로 개시 코돈 쪽에서부터 번역 frame을 확인하기 쉽다.
용도
- 외래 유전자의 cloning과
lac
promoter를 이용한 유전자 발현
- M13 primers를 이용한 DNA 염기서열 결정
- Kilo-Sequence용 Deletion Kit (Code 6030)를 이용한 긴 단편의 염기서열 결정
사용상의 주의
pTV118N은
lac
Z 영역에 대한 M13IG 영역의 방향이 pUC118의 역방향이므로 M13 forward primer를 사용하여 한가닥 DNA의 염기서열을 결정할 수 없다.
관련제품
M13 Primer RV-N (TaKaRa Code 3833)
M13 Primers (Code 3810, 3820, 3831, 3832A/B, 3830A/B)
pUC118/pUC119와 pTV118N의 구조
Keyword :
Vector (Cloning 용)
M13 mp18 Single Strand DNA(Virion DNA)
pBR322 DNA
pKF18k-2/19k-3 DNA
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pUC118/119 type vector
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효율 높은 TA-cloning에
TaKaRa T-Vector pMD20