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  • Å䡤ÀÏ¿äÀÏ, °øÈÞÀÏÀº ÈÞ¹«ÀÔ´Ï´Ù.
Home > ÀüÁ¦Ç°º¸±â > Gene transfer (virus) > Lentivirus > Lenti-X¢â qRT-PCR Titration Kit
1 step qRT-PCR·Î ¿ª°¡¸¦ ºü¸£°í Á¤È®ÇÏ°Ô ÃøÁ¤

Lenti-X¢â qRT-PCR Titration Kit

-

Á¦Á¶»ç Á¦Ç°ÄÚµå Á¦Ç°¸í ¿ë·® °¡°Ý
(ºÎ°¡¼¼º°µµ)
ºñ°í »ç¿ëÀڸŴº¾ó
Clontech
631235
Lenti-X¢â qRT-PCR Titration Kit
°ü·ÃÇмú ±¸¸ÅÇϱâ
200 ȸ
(Package)
1,070,000¿ø  Á¦Á¶»ç ÆäÀÌÁö·Î ¹Ù·Î°¡±â x32781, x32782, x32864

  • ¹ÙÀÌ·¯½º »ý»ê ÈÄ ´çÀÏ ³» ¿ª°¡ÃøÁ¤ºÎÅÍ transduction±îÁö ÁøÇà °¡´É: ¾à 4½Ã°£ ¼Ò¿ä
  • HIV-1 À¯·¡ÀÇ lentivirus¿¡ ´ëºÎºÐ Àû¿ë °¡´É
  • Á¤È®ÇÑ ¿ª°¡¸¦ °è»êÇÏ¿© ÀçÇö¼º ÀÖ´Â ½ÇÇè °¡´É

Virus ¿ª°¡ ÃøÁ¤ÀÌ ÇÊ¿äÇÑ ÀÌÀ¯
    1. Lentivirus Packaging °úÁ¤ÀÌ Á¦´ë·Î µÇ¾ú´ÂÁö È®ÀÎ
    2. ¿ÀÂ÷¾øÀÌ ÀÏ°üµÈ ½ÇÇè¼öÇà
    3. 100% TransductionÀ» À§ÇÑ ÃæºÐÇÑ MOI °áÁ¤
    4. Copy number Á¶ÀýÀ» ÅëÇÑ À¯ÀüÀÚ ¹ßÇö¾ç Á¶Àý

Á¦Ç°¼³¸í
Lenti-X¢â qRT-PCR Titration Kit´Â viral RNA Á¤Á¦¸¦ À§ÇÑ spin columnºÎÅÍ dye-based one-step RT qPCR ½Ã¾à, standard curve ÀÛ¼ºÀ» À§ÇÑ control templateÀÌ ¸ðµÎ Æ÷ÇԵǾî ÀÖ´Â all-in-one kit·Î viral RNAÀÇ copy¼ö¸¦ Á¤·®ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù (±×¸² 1). À̸¦ »ç¿ëÇØ lentivirusÀÇ ¿ª°¡¸¦ ¸Å¿ì ºü¸£°í °£ÆíÇϸ鼭µµ Á¤È®ÇÏ°Ô ÃøÁ¤ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù.

±×¸² 1. Lenti-X¢â qRT-PCR Titration KitÀÇ workflow.

ºü¸¥ physical titer ÃøÁ¤À¸·Î ÀçÇö¼º ³ôÀº ½ÇÇè °¡´É
Functional titer¸¦ ÃøÁ¤ÇÏ´Â ÀϹÝÀûÀÎ titration¹ýÀº Çü±¤ ¸¶Ä¿ À¯ÀüÀÚ, Ç×»ýÁ¦ ÀúÇ× À¯ÀüÀÚ ¶Ç´Â ¼¼Æ÷ÀÇ ¿°»öÀ» °ËÃâÇÏ´Â ¹æ¹ýÀ¸·Î ÀϹÝÀûÀ¸·Î2~10ÀÏ Á¤µµÀÇ ±â°£ÀÌ ¼Ò¿äµÈ´Ù (±×¸² 2). ÀÌ Áß °¡Àå ºü¸¥ ¹æ¹ýÀÎflow cytometry¸¦ »ç¿ëÇØ Çü±¤ ¸¶Ä¿ À¯ÀüÀÚ¸¦ °ËÃâÇÏ´Â ¹æ¹ý ¿ª½Ã 48½Ã°£ ÀÌ»óÀÇ ½Ã°£ÀÌ ¼Ò¿äµÈ´Ù.
ÀÌ·¸°Ô functional titer¸¦ ÃøÁ¤ÇÏ´Â ¹æ¹ýÀº ½Ã°£ÀÌ ¸¹ÀÌ ¼Ò¿äµÇ±â ¶§¹®¿¡ Àå±â º¸°ü °úÁ¤¿¡¼­ ¹Ýº¹ÀûÀÎ µ¿°á ¹× ¿ëÇØ °úÁ¤À¸·Î lentivirus stockÀÇ °¨¿°¼ºÀÌ °¨¼ÒÇÏ°Ô µÈ´Ù. ÀÌ·¯ÇÑ ¹æ¹ýÀ¸·Î´Â °¨¼ÒµÈ °¨¿°¼º ÃøÁ¤ÀÌ ºÒ°¡´ÉÇÏ°í transduction ½Ã ¼öÀÏ ÀüÀÇ °á°ú°ªÀ¸·Î ¹ÙÅÁÀ¸·Î MOI¸¦ °è»êÇÏ°Ô µÈ´Ù.

±×¸² 2. Lenti-X¢â qRT-PCR Titration Kit¸¦ »ç¿ëÇÏ¸é ¸Å¿ì ªÀº ½Ã°£¿¡ ¿ª°¡¸¦ ÃøÁ¤ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù.

¹Ý¸é Lenti-X¢â qRT-PCR Titration Kit·Î physical titer¸¦ ÃøÁ¤ÇÏ°Ô µÇ¸é 4½Ã°£ À̳» ¿ª°¡¸¦ ÃøÁ¤ÇÏ¿© titration¿¡ ÇÊ¿äÇÑ ½Ã°£À» ´ÜÃàÇϱ⠶§¹®¿¡ ¹ÙÀÌ·¯½ºÀÇ harvestÈÄ ´çÀÏ¿¡ transductionÀ» ÁøÇàÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. µû¶ó¼­ lentivirus stockÀÇ º¸°ü °úÁ¤¿¡¼­ ¹ß»ýÇÒ ¼ö ÀÖ´Â °¨¿°¼º ÀúÇÏ ¾øÀÌ Á¤È®ÇÑ MOI¸¦ °è»êÇÒ ¼ö ÀÖ°í, À̸¦ ÅëÇØ ÀçÇö¼º ³ôÀº °á°ú¸¦ ¾òÀ» ¼ö ÀÖ´Ù.
qRT-PCR titration
Lenti-X¢â qRT-PCR Titration Kit¿¡´Â qRT-PCR ½Ã¾àÀÌ Æ÷ÇԵǾî ÀÖÀ¸¸ç, lentivirusÀÇ backbone ¼­¿­ ȤÀº ¿©±â¿¡ cloningµÈ À¯ÀüÀÚ (cDNA ¹× shRNA ¿Ü)¿Í °ü°è¾øÀÌ ¸ðµç HIV-1 À¯·¡ÀÇ lentivirus¿¡ Àû¿ëÀÌ °¡´ÉÇÏ´Ù. ¶ÇÇÑ RNA Á¤Á¦ ´Ü°è¿¡¼­ DNase IÀ» ó¸®Çϱ⠶§¹®¿¡ lentivirus »ý»ê ½Ã transfectionÇÑ plasmid DNAÀÇ ÀÜ¿©¹°ÀÇ ¿µÇâ ¾øÀÌ Á¤È®ÇÏ°Ô Á¤·®ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù.


±×¸² 3. Lenti-X¢â qRT-PCR Titration KitÀº ³ÐÀº ¹üÀ§ÀÇ titrationÀÌ °¡´ÉÇÏ´Ù.
ÆгΠA. 2 X 109 ~ 2 X 102 ¹üÀ§ Lenti-X RNA Control TemplateÀ» ÀÌ Á¦Ç°À» »ç¿ëÇÑ qRT-PCR·Î °ËÃâÇÑ °æ¿ìÀÇ ÁõÆø°î¼±À¸·Î 106¹è ÀÌ»óÀÇ ³ÐÀº ¹üÀ§¿¡¼­ titrationÀÌ °¡´ÉÇÏ´Ù´Â °ÍÀ» È®ÀÎÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. ÆгΠB. ÁõÆø°î¼±À» ¹ÙÅÁÀ¸·Î ÀÛ¼ºÇÑ standard curveÀÌ´Ù. À̶§ Ct °ª°ú RNA copy¼ö (log scale)°¡ ¶Ù¾î³­ ¼±Çü¼ºÀ» º¸Àδ٠(R2=1.00, PCR È¿À² 99.3%).


±×¸² 4. Lenti-X¢â qRT-PCR Titration Kit¸¦ »ç¿ëÇÑ lentivirus »óµî¾×ÀÇ titration °á°ú.
LentivirusÀÇ genomeÀ» Á¤Á¦ÇÏ¿© 10¹è¾¿ Èñ¼®ÇÑ ÈÄ ÃøÁ¤ÇÑ titration °á°úÀÌ´Ù. Lentivirus´Â Lenti-X¢â ½Ã¸®ÁîÀÇ ½Ã½ºÅÛÀ¸·Î »ý»êÇÏ¿© transfection ÈÄ 3ÀÏ µÚ¿¡ lentivirusÀÇ »óµî¾×À» ȸ¼öÇÏ¿© »ç¿ëÇÏ¿´°í, Á¦ÀÛµÈ lentivirus¸¦ -80¡É¿¡¼­ titration Àü±îÁö º¸°ü ÈÄ »ç¿ëÇÏ¿´´Ù.
¹ÙÀÌ·¯½ºÀÇ °¨¿°¼º°ú RNA titrationÀÇ »ó°ü°ü°è
qRT-PCRÀ» »ç¿ëÇÑ titration kit´Â »ç¿ëÀÌ Æí¸®ÇÏ°í ÀçÇö¼ºÀÌ ³ôÀ¸¸ç ªÀº ½Ã°£ ¾È¿¡ Á¤È®ÇÑ °á°ú¸¦ Á¦°øÇϱ⠶§¹®¿¡ ¹ÙÀÌ·¯½ºÀÇ titration¿¡ ÀÌ»óÀûÀÌ´Ù. ¶ÇÇÑ ¹ÙÀÌ·¯½º stockÀÇ functional titer (IFU/§¢)À» º°µµÀÇ µ¶¸³ÀûÀÎ ¹æ¹ýÀ¸·Î °°ÀÌ ÃøÁ¤Çϸé RNA titer (copy/§¢)¿Í functional titerÀÇ °è¼ö (IFU/Copy)¸¦ ±¸ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. ÀÌ °è¼ö¸¦ È°¿ëÇϸé ÃßÈÄ ½ÇÇè¿¡¼­ ªÀº ½Ã°£³»¿¡ ¾òÀº RNA titer¸¦ È°¿ëÇØ functional titer (IFU/§¢)¸¦ ÃßÁ¤ÇÒ ¼ö ÀÖ°í À̸¦ ¹ÙÅÁÀ¸·Î MOI¸¦ °è»êÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù.
³»¿ë
Lenti-X¢â qRT-PCR Titration Kit (Code 631235)

Lenti-X¢â qRT-PCR Titration Components
    Lenti-X RNA Control Template (5 x 108 copies/§¡)

30 §¡

    DNase I (5 units/§¡)

80 §¡

    DNase I Buffer (10X)

50 §¡

    Lenti-X Forward Titer Primer (10 ¥ìM)

100 §¡

    Lenti-X Reverse Titer Primer (10 ¥ìM)

100 §¡

    EASY Dilution Buffer (1 §¢/tube)

4 tubes


NucleoSpin RNA Virus Kit (10 preps)

Quant-X¢â One-Step qRT-PCR TB Green Kit (200 ȸ)
    2X Quant-X Buffer (0.84 §¢ per tube)

3 tubes

    Quant-X Enzyme (5 U/§¡)

100 §¡

    RT Enzyme Mix

100 §¡

    RNase-Free Water (1.25 §¢ per tube)

2 tubes

    50X ROX Reference Dye LSR

100 §¡

    50X ROX Reference Dye LMP

100 §¡

º¸Á¸
Lenti-X RNA Control Template: -70¡É
NucleoSpin RNA Virus Kit: ½Ç¿Â
±×¿Ü: -20¡É
°ü·ÃÁ¦Ç°
- FunctionalÇÑ ¹ÙÀÌ·¯½º¸¦ ´õ ¸¹ÀÌ »ý»êÇÏ´Â transfection ½Ã¾à TransIT-VirusGEN¢ç Transfection Reagent (Code MIR 6700)
- 10ºÐ¸¸¿¡ ³¡³ª´Â lentivirus ¿ª°¡ °£ÀÌ ÃøÁ¤ Kit Lenti-X¢â GoStix¢â Plus (Code 631280)
- ELISA¹ýÀ» »ç¿ëÇÑ Á¤È®ÇÑ lentivirus titration Kit Lenti-X¢â p24 Rapid Titer Kit (Code 631476¿Ü)
- Lentivirus ¿ª°¡°¡ ³·´Ù¸é ¹ö¸®Áö ¸»°í ³óÃàÇؼ­ »ç¿ë Lenti-X¢â Concentrator (Code 631231)
- Functional titer¸¦ °¡Àå Á¤È®ÇÏ°Ô ÃøÁ¤ °¡´ÉÇÑ ¹æ¹ý Lenti-X¢â Provirus Quantitation Kit (Code 631239)
- Àúµ¶¼º°ú °íÈ¿À²À» Çѹø¿¡ ÀâÀº transduction enhancer RetroNectin¢ç (Code T100A ¿Ü)




Keyword : Lentivirus,·»Æ¼¹ÙÀÌ·¯½º,¿ª°¡,¿ª°¡ÃøÁ¤,Titer,Titration,ŸÀÌÅÍ,Á¤·®,¹ÙÀÌ·¯½º Á¤·®,¹ÙÀÌ·¯½º ·»Æ¼,Lenti

Lentivirus
>
Lentiviral expression vector¸¦ Æ÷ÇÔÇÑ ½Ã½ºÅÛ..
CMV promoter º¤ÅÍ ½Ã½ºÅÛ
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Á¶Ç÷¸ð¼¼Æ÷, Áٱ⼼Æ÷ µîÀÇ Lentiviral transdu..
EF1 ¥á promoter º¤ÅÍ ½Ã½ºÅÛ
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SARS-CoV-2-pseudotyped lentivirus »ý»ê
Lenti-X¢â SARS-CoV-2 Packaging Mix
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ÀÓ»ó Ä¡·áÁ¦ °³¹ßÀ» À§ÇÑ
3¼¼´ë Lentivirus packaging system
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´Ù¾çÇÑ Çü±¤´Ü¹éÁú ¸®Æ÷Å͸¦ Æ÷ÇÔÇÑ Lentiviral..
Çü±¤´Ü¹éÁú ¸®Æ÷ÅÍ º¤ÅÍ
>
Tetracycline Á¸Àç ÇÏ¿¡¼­¸¸ ¸ñÀû ´Ü¹éÁúÀ» ¹ß..
Tet-on inducible Expression (Two vectors)
>
Tetracycline Á¸Àç ÇÏ¿¡¼­¸¸ ¸ñÀû ´Ü¹éÁúÀ» ¹ß..
Tet One Inducible Expression (One vector)
>
Lentivirus¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ sgRNA, Cas9 gene deliver..
Lenti-X¢â CRISPR/Cas9 System
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Tetracycline Á¸Àç ÇÏ¿¡¼­¸¸ ¸ñÀû ´Ü¹éÁúÀ» ¹ß..
(Legacy) Tet-Inducible expression ½Ã½ºÅÛ
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Pormoterless vector·Î pomorter È°¼º ¿¬±¸
Reporter assay ½Ã½ºÅÛ (Promoterless vector)
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Transfection ½Ã¾àÀ» Æ÷ÇÔÇÏ¿© ´õ °£´ÜÇÑ packa..
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239T, HEK-293 Cellº¸´Ù ´õ ³ôÀº packaging È¿..
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